靶向CEA嵌合抗原受体表达载体的构建与慢病毒制备

摘要

目的 构建靶向癌胚抗原(carcinoembryonic antigen,CEA)的嵌合抗原受体C2-45/CAR,制备慢病毒,为CEA阳性肿瘤的细胞免疫治疗奠定研究基础。方法 通过基因重组技术将CEA scFv、CD8铰链区和跨膜区、共刺激分子CD137和CD3ζ克隆入慢病毒表达载体pCDH中(pCDH-C2-45/CAR),酶切和测序鉴定,用慢病毒制备试剂盒合成慢病毒LV-C2-45/CAR,梯度稀释法测定病毒滴度,免疫印迹法(Western blotting)检测目的基因表达。结果 经转化、鉴定,慢病毒表达载体pCDH-C2-45/CAR构建成功;成功合成慢病毒LV-C2-45/CAR(对照LV-pCDH),Western blotting检测显示慢病毒LV-C2-45/CAR感染293T细胞后可见C2-45/CAR表达。结论 靶向CEA嵌合抗原受体表达载体及慢病毒制备成功,为CAR修饰T细胞、NK细胞杀伤CEA阳性肿瘤研究奠定基础。