长链非编码RNA人去泛素化酶含有卵巢肿瘤结构域的6B反义RNA 1通过微小RNA-122-5p促进肝癌细胞增殖、侵袭和迁移的研究

摘要

目的探讨长链非编码RNA（lncRNA）人去泛素化酶含有卵巢肿瘤结构域的6B反义RNA 1（OTUD6B-AS1）通过微小RNA（microRNA,miR）-122-5p对肝癌细胞增殖、侵袭和迁移的影响。方法反转录-聚合酶链反应（RT-PCR）检测2010年1月至2013年1月河南科技大学第一附属医院手术切除的98例肝癌组织标本及其配对的癌旁组织、肝癌细胞系（Hhu7、Hep3B、HCCLM3、MHCC97H）和人正常肝细胞（LO2）中OTUD6B-AS1的相对表达量。用脂质体2000（Lipofectamine? 2000）分别将sh-NC（sh-NC组）和sh-OTUD6B-AS1（sh-OTUD6B-AS1组）转染入Hep3B细胞。克隆形成实验和细胞计数试剂盒（CCK-8）法检测细胞增殖;Transwell检测细胞侵袭;细胞划痕实验检测细胞迁移。用TargetScan预测OTUD6B-AS1与miR-122-5p的互补结合位点,随后用双荧光素酶报告基因实验确定两者的靶向关系。为了进一步验证两者调控关系,将Hep3B细胞分别分为sh-NC+miR-NC组、sh-OTUD6B-AS1+miR-NC组、sh-OTUD6B-AS1+anti-miR-122-5p组,比较3组细胞增殖、侵袭和迁移。两两比较采用t检验;多组间比较采用单因素方差分析,进一步两两比较采用LSD-t检验;生存分析采用Log-rank检验。结果肝癌组织中OTUD6B-AS1相对表达量为2.42±0.96,明显高于癌旁组织（0.92±0.39,t=14.331,P＆0.05）,差异有统计学意义。肝癌细胞系Hhu7（2.84±0.23）、Hep3B（3.80±0.68）、HCCLM3（1.89±0.25）和MHCC97H（2.01±0.71）的OTUD6B-AS1相对表达量明显高于正常肝细胞LO2（1.04±0.23,F=51.827,P＆0.05）,差异有统计学意义。sh-OTUD6B-AS1组细胞增殖、侵袭和迁移能力均低于sh-NC组（t=5.556、2.454,P值均＆0.05）,差异均有统计学意义。双荧光素酶报告基因实验结果证实OTUD6B-AS1可以靶向调控miR-122-5p。sh-NC+miR-NC组和sh-OTUD6B-AS1+anti-miR-122-5p组增殖、侵袭和迁移能力明显高于sh-OTUD6B-AS1+miR-NC组（F=111.908、0.301,P值均＆0.05）,差异均有统计学意义。结论 OTUD6B-AS1可能通过负调控miR-122-5p促进肝癌细胞的增殖、侵袭和迁移。