3-氨基吡啶-2-甲醛硫代缩氨基脲对不同p53状态肝癌细胞中生长抑制及DNA损伤诱导基因45β的诱导差异及其机制

摘要

目的探讨3-氨基吡啶-2-甲醛硫代缩氨基脲（Triapine）对不同p53状态肝癌细胞的生长抑制及DNA损伤诱导基因45β（GADD45β）诱导差异及其调控机制。方法转染p53全序列建立Hep3B+p53;体外合成GADD45β近端6个启动子序列群（-618-314）,构建荧光素表达质粒,转染肝癌细胞株HepG2、Hep3B和Hep3B+p53;以实时荧光定量聚合酶链反应（FQ-PCR）比较Triapine对GADD45β表达诱导及其近端启动子活性影响差异;进一步比较对DNA合成和细胞克隆形成能力抑制差异;并通过半胱氨酰天冬氨酸特异性蛋白酶（Caspase）-3的表达变化测定细胞凋亡的发生和发展。结果 Triapine对Hep3B中GADD45诱导并不明显,Hep3B+p53对Triapine敏感性明显增加,2.5、5.0μmol/L剂量下GADD45/甘油醛-3-磷酸脱氢酶（GAPDH）比值分别为0.0425和0.0704,并呈现出剂量-效应的正相关关系。荧光素分析提示Triapine作用Hep3B+p53后的启动子核因子（NF）-κB（-618/+6）和E2F-1（-470/+6）活性较Hep3B明显增强约1.3倍和0.7倍。Triapine能够更加明显地抑制Hep3B+p53的DNA合成能力和细胞克隆形成能力,5μmol/L Triapine对Hep3B+p53DNA合成的抑制率为40.89%,对细胞克隆形成能力的抑制率达到68.16%,与Hep3B比较差异有统计学意义（P＜0.05）。Triapine作用后Hep3B+p53的Caspase-3能迅速激活,活性高峰提前出现于6 h。结论 p53在核糖核苷酸还原酶抑制剂化疗药物对肝癌细胞的GADD5诱导中具有重要作用,其作用机制可能是增强转录调节因子的表达水平。