长链非编码RNA核富集转录体1促进人肝癌细胞增殖和侵袭的研究

摘要

目的在人肝细胞癌（HCC）标本中检测癌和癌旁组织中长链非编码RNA（1ncRNA）核富集转录体1（NEAT1）的表达差异,应用化学合成小干扰RNA（siRNA）抑制两组人肝癌细胞株（HepG2和SMMC-7721）NEAT1的转录,观察NEAT1转录降低后对HCC细胞的表达谱、侵袭和增殖功能的影响。方法利用Trizol-氯仿提取HCC组织标本和癌旁组织（n=12）,细胞株（HepG2、SMMC-772、HCC-LM3）中的总RNA,实时定量反转录聚合酶链反应（RT-qPCR）检测各组NEAT1表达差异[甘油醛-3-磷酸脱氢酶（GAPDH）作为内参],使用转染试剂Lipofectamine 2000和siRNA NEAT1（终质量浓度100 nmol/L）对HepG2和SMMC-7721细胞进行NEAT1敲低,RT-qPCR检测NEAT1敲低效果,并对NEAT1敲低组（NEAT1表达量＜对照组40%）和对照组细胞（n=2）进行表达谱测序,检测NEAT1敲低后对HCC细胞各肿瘤相关基因表达的影响,对NEAT1敲低组和对照组细胞进行羧基荧光素二醋酸盐琥珀酰亚胺脂（CFSE）标记（终质量浓度5μmol/L）的细胞（2×10~5个/孔）增殖检测、细胞计数试剂盒（CCK-8）进行细胞增殖检测（10μl/2000个细胞）、Transwell细胞侵袭移动能力检测来探究NEAT1对HCC细胞（2×10~5个/孔）增殖和侵袭功能的影响。结果NEAT1在HCC细胞和癌组织中表达量高于癌旁组织（P＜0.01）,敲低HCC细胞株NEAT1表达导致很多参与肿瘤发生、发展通路的基因表达量改变（229个基因表达上调,148个基因表达下调,表达量改变超过2倍且P＜0.05）,敲低HCC细胞株NEAT1表达降低了HCC细胞体外增殖（P＜0.01）、侵袭（P＜0.01）的能力。结论 lncRNA NEAT1在人肝细胞癌的发生、发展中发挥了原癌基因的作用。