CAR菌TaqMan MGB探针法实时荧光定量PCR快速检测方法的建立与应用

摘要

目的 建立特异、敏感、快速检测CAR菌的TaqMan MGB探针荧光定量PCR方法.方法 针对CAR菌16S rRNA基因序列设计特异性引物和探针,建立MGB探针荧光定量PCR方法,验证方法的特异性、敏感性和稳定性.对2008～2012年期间采集的1344份临床标本中的CAR菌进行检测,同时进行普通PCR检测作为对照.结果 CAR菌TaqMan MGB探针荧光定量PCR方法具有高度特异性,与肺炎支原体、侵肺巴斯德菌、支气管鲍特杆菌、肺炎克雷伯杆菌、大肠埃希菌、肺炎链球菌间无交叉反应,检测灵敏度达2.7拷贝.标准曲线显示各浓度范围内具有良好线性关系,相关系数为0.999,斜率为-3.22,TaqMan MGB探针荧光定量PCR效率为104.432％.对1344份标本进行检测,结果 TaqMan MGB探针荧光定量PCR检出510份CAR菌阳性样本.TaqMan MGB探针荧光定量PCR能够直接从标本中检出CAR菌DNA,检测时间仅为40 min.结论 TaqMan MGB探针荧光定量PCR方法具有可靠、特异、敏感的特点,适用于CAR菌的快速检测.