p27kip1真核表达载体的构建及其对人胆管癌细胞生长的影响

摘要

目的:构建p27kip1真核表达载体并进行基因转染,研究其对人胆管癌细胞生长特性的影响.方法:将人p27kip1 cDNA克隆至真核表达载体pClneo的Not I酶切位点中,然后应用DOTAP脂质体将重组质粒转染人胆管癌QBC939细胞中,用G418筛选抗性细胞克隆,采用PCR、RT-PCR和Western印迹法检测外源性目的基因在靶细胞基因组中的整合及表达,以及转基因细胞对裸鼠致瘤性能力的改变.结果:成功构建p27kip1基因真核表达载体,并将其导入QBC939细胞中.经G418筛选得到稳定表达p27kip1基因的细胞株,p27kip1基因转染细胞生长速度明显减慢,并出现分化的迹象,其裸鼠致瘤性能力明显降低.结论:p27kip1基因具有抑癌基因的作用,在未来胆管癌的基因治疗中可能具有应用前景.