体积排阻色谱法定量检测9种型别人乳头瘤病毒原液中病毒样颗粒

摘要

据统计,5％以上的人类癌症由人乳头瘤病毒(HPV)导致.HPV疫苗的使用,尤其是多价HPV疫苗的使用,可有效预防HPV感染和肿瘤的发生.例如,9价HPV疫苗可有效预防90％以上HPV相关癌前病变.人乳头瘤病毒样颗粒(VLP)是HPV疫苗的唯一抗原.VLP由360份衣壳蛋白L1组成.VLP的含量测定对HPV原液和HPV疫苗的质量评价至关重要.该文发展了一种以体积排阻色谱(SEC)为基础的9种型别人乳头病毒样颗粒的定量方法.实验优化了包括色谱柱类型、色谱柱孔径、流动相离子强度和流动相pH值在内的色谱条件.经过考察,以SHIMSEN Ankylo SEC-300色谱柱(300 mm×7.8 mm,3μm)为固定相,以含有300 mmol/L NaCl和50 mmol/L磷酸盐(pH 7.0)的缓冲溶液为流动相时,VLP的色谱峰更窄,从而可获得更高的响应和更好的灵敏度,因此选择该色谱条件用于VLP与基质的分离.优化所得的方法具有较宽的线性范围,良好的重复性(峰面积的相对标准偏差不大于5.0％)和灵敏度(定量限为4.58～15.24μg/mL).将方法用于HPV原液中VLP的含量测定,监测VLP的稳定性.结果显示,HPV原液中VLP颗粒不稳定,于4°C放置一周后,VLP含量与生产后立即测得的含量相比存在一定程度的降解.此外,方法还可用于疫苗上清液中游离蛋白质的分析,监测铝佐剂对VLP的吸附情况.被测厂家的铝佐剂可较好的吸附VLP,无明显残余蛋白质检出.与传统的蛋白质定量方法相比,如Folin-酚法(Lowry法),该法具有操作简单、自动化程度高、分析通量高等优点,可实现VLP含量的批量化分析.