病毒样颗粒

摘要： 为在昆虫细胞中表达猪流行性腹泻病毒(PEDV)的S和M蛋白,并探讨S和M蛋白能否自动组装成病毒样颗粒(VLPs)分泌至培养基中,本研究构建了3种不同的重组质粒(pFastBac-S、pFastBac-M和pFastBac-S-M),转化入DH10Bac感受态细胞,经蓝白斑筛选及PCR鉴定获得重组Bacmid,通过转染昆虫细胞Sf9获得重组杆状病毒(BV-S、BV-M和BV-S-M)。在悬浮培养的昆虫细胞Sf9中进行表达,表达分泌的上清通过蔗糖梯度离心进行浓缩纯化,最终获得分泌型的S-MVLPs。通过Western-blotting分析S和M蛋白的表达和分泌特性,透射电镜观察VLPs形态,间接ELISA检测VLPs与猪PEDV阳性血清的反应性,最后免疫小鼠后检验其免疫原性。结果显示,S和M蛋白均能以单独或共表达的形式(S-M)分泌至培养基中。电镜下可观察到由S-M蛋白形成的直径约为90~190 nm的VLPs。间接ELISA结果显示,S、M和S-M蛋白可与PEDV猪阳性血清发生特异性反应,免疫小鼠3次后可产生高水平特异性Ig G抗体。以上结果表明,在Sf9昆虫细胞中共表达S和M蛋白可以获得分泌型S-MVLPs,并具有良好的免疫原性。

摘要： 为了建立一种更加安全、可靠的猪圆环病毒2型(PCV2)抗体检测方法,以实验室前期通过大肠杆菌表达系统获取的PCV2病毒样颗粒(VLPs)为包被抗原,建立了一种间接ELISA方法。用建立的间接ELISA方法检测272份来自不同猪场的血清,并与不同间接ELISA试剂盒的检测结果进行比较。结果表明,基于PCV2 VLPs的间接ELISA的特异性和敏感性分别为100.00%和91.67%。其与Ceditest CIRC Ig G ELISA试剂盒(Cedi-Diagnostics B.V.)和猪圆环病毒2型ELISA抗体检测试剂盒(科前)的符合率分别为97.56%和95.12%。因此,基于PCV2 VLPs的间接ELISA可以有效地用于猪血清样本中PCV2抗体的检测,为PCV2的流行病学调查及PCV2 VLPs疫苗的免疫效果评价提供了新的选择。

摘要： 为了表达猪圆环病毒3型(porcine circovirus type 3,PCV3)Cap蛋白,按照昆虫细胞密码子偏嗜性对ORF2基因进行优化并在N端加上His标签基因,合成的ORF2基因片段克隆入pFastBac Dual杆状病毒穿梭载体;将重组质粒转化大肠杆菌DH10-Bac感受态后通过蓝白斑筛选获得重组杆粒Bacmid-C2;将重组杆粒转染至SF9细胞5 d后收集细胞上清液;连续传代3次观察细胞病变。将接毒后的SF9细胞样通过Western blot及间接免疫荧光(IFA)进行Cap蛋白表达的鉴定。利用蔗糖密度梯度离心对病毒样颗粒的Cap蛋白纯化后进行透射电镜观察。结果显示:SDS-PAGE和Western blot检测发现重组杆状病毒在昆虫细胞中能够有效表达Cap蛋白,且与His-tag单抗及PCV3阳性血清发生特异性反应;IFA进一步鉴定感染了重组病毒的昆虫细胞与His单抗产生特异性荧光;透射电镜可以明显观察到14~17 nm左右形态规则的病毒样颗粒(VLPs)。PCV3 Cap蛋白的成功表达和鉴定将为研究Cap蛋白的免疫原性和空间结构奠定基础,也为探讨开发PCV3的亚单位疫苗提供了可能。

摘要： 为探究水貂肠炎病毒(MEV)VP2病毒样颗粒(VLPs)作为嵌合载体携带外源抗原的能力,通过PCR技术将鸡卵清蛋白(OVA)第257~264位氨基酸短肽(SIINFEKL)插入到MEV VP2的N末端获得OVA_(257-264)-VP2,通过克隆重组和蓝白斑筛选分别获得重组质粒Bacmid-VP2、Bacmid-OVA_(257-264)-VP2,转染到昆虫细胞表达获得VP2、OVA_(257-264)-VP2蛋白的重组杆状病毒;通过间接免疫荧光和Western-blot分析蛋白反应原性,透射电镜观察VLPs形态,血凝试验检测其血凝特性。间接免疫荧光和Western-blot结果表明,重组蛋白VP2和OVA_(257-264)-VP2都具有良好的反应原性。透射电镜观察结果表明,VP2与OVA_(257-264)-VP2都可以形成病毒样粒子,颗粒直径均约为22 nm。血凝试验结果表明,重组蛋白VP2和OVA_(257-264)-VP2与天然病毒的凝集特性相同,均可达到1∶16 384。结论:在MEV VP2的N端插入OVA257-264,不影响VP2病毒样颗粒的组装,VP2和外源多肽都保持有良好的反应原性,MEV VP2可以作为疫苗载体递呈外源抗原。

摘要： 为了进一步增强矿化口蹄疫病毒样颗粒疫苗的免疫效果,筛选最佳配伍佐剂是当前的研究重点之一。本研究选择不同佐剂与矿化O型口蹄疫病毒样颗粒(FMD VLPs-CaP)配伍,通过肌肉途径接种豚鼠,分析佐剂毒性,不同时间点采血测定其特异性抗体,并于免疫后第28天攻毒,测定其保护率。结果显示,所选国内佐剂的组织毒性较小,有较好的生物相容性,与进口佐剂ISA206之间免疫效果有差异,但其中北京生泰尔生物科技有限公司生产的STR-1佐剂可以达到与进口佐剂ISA206相似的免疫效果,特异抗体效价显著高于ISA206组(P<0.05),且与206佐剂同样能维持28 d,豚鼠攻毒后可以提供100%保护。以上结果表明,STR-1佐剂可作为矿化FMD VLPs疫苗佐剂的候补产品,为口蹄疫疫苗佐剂产品的选择提供了前期研究基础。

摘要： 【目的】利用大肠杆菌原核表达系统表达猪圆环病毒2型Cap蛋白及在其C-端嵌合PRRSV T细胞抗原表位的Cap嵌合蛋白,对Cap蛋白形成的病毒样颗粒(VLPs)的稳定性、免疫原性以及C-端嵌合PRRSV T细胞抗原表位VLPs的热稳定性进行研究,为猪圆环病毒2型(PCV2)VLPs疫苗的高效制备及基于Cap VLPs纳米骨架展示技术嵌合疫苗的开发奠定基础。【方法】采用分子生物学方法合成PCV2b型强毒株ZJ的cap基因,在其C-端插入PRRSV T细胞抗原表位T1、T2、T3、T4、T5,构建cap-T1~cap-T5基因;将cap及cap-T1~cap-T5基因与pET28a表达载体连接,构建重组表达载体,转染大肠杆菌ClearColi TM BL21(DE3)进行诱导表达,并对表达产物的热稳定性及免疫效果进行检测。【结果】实现了Cap蛋白及其C-端嵌合PRRSV T细胞抗原表位的Cap-T1、Cap-T2、Cap-T3、Cap-T4和Cap-T5嵌合蛋白在大肠杆菌中的可溶性表达,并成功观察到了VLPs;表达产物热稳定性分析显示,在60°C处理30 min条件下,Cap VLPs保持稳定,而C-端嵌合PRRSV T细胞抗原表位的VLPs热稳定性大幅下降;小鼠免疫效果检测显示,Cap VLPs诱导产生了高水平特异性抗体,其中VLPs+佐剂S350组效果最好。【结论】利用大肠杆菌表达系统表达的PCV2 Cap蛋白可高效自组装成耐热和高免疫原性的VLPs,但在Cap蛋白C-端嵌合PRRSV T细胞抗原表位后的嵌合VLPs组装效果和稳定性急剧下降,提示PCV2 VLPs作为纳米骨架用于传染病疫苗研发仍有较大局限性。

摘要： 人乳头瘤病毒(human papillomavirus,HPV)广泛感染人类,能够导致宫颈癌等恶性肿瘤的发生,严重危害人类的健康.HPV疫苗能够有效阻止HPV感染及其导致的疾病,世界卫生组织正在实施全球消除宫颈癌的计划.本文结合厦门大学在HPV疫苗研发中取得的研究成果,综述了HPV及其疫苗研究领域的进展,包括HPV的生物学和流行病学特征、预防性疫苗的研究现状和应用、基于结构的新一代多价疫苗设计和治疗性疫苗的研究进展等,阐述我国HPV疫苗研发从跟跑、并跑到领跑的研究历程,并展望未来HPV疫苗研究的主要方向.

摘要： 癌症作为人类健康的头号杀手,在全球被广泛研究.病毒样颗粒是由多个病毒的一种或几种结构蛋白组装而成的颗粒,不含病毒核酸,不能进行自主复制,具有与病毒类似的整体结构.通过化学和基因工程的方法对病毒样颗粒中所含的蛋白进行功能化修饰,可使其成为一种具有众多应用前景的体系.病毒样颗粒作为一种强有力的免疫激活剂,同时兼具纳米颗粒尺寸的优势,被广泛应用于肿瘤治疗中药物递送载体和疫苗的设计.本文对病毒样颗粒在上述两个领域的最新研究进展进行综述,旨在为病毒样颗粒在肿瘤治疗及相关的药物研发等提供参考.

摘要： 据统计,5％以上的人类癌症由人乳头瘤病毒(HPV)导致.HPV疫苗的使用,尤其是多价HPV疫苗的使用,可有效预防HPV感染和肿瘤的发生.例如,9价HPV疫苗可有效预防90％以上HPV相关癌前病变.人乳头瘤病毒样颗粒(VLP)是HPV疫苗的唯一抗原.VLP由360份衣壳蛋白L1组成.VLP的含量测定对HPV原液和HPV疫苗的质量评价至关重要.该文发展了一种以体积排阻色谱(SEC)为基础的9种型别人乳头病毒样颗粒的定量方法.实验优化了包括色谱柱类型、色谱柱孔径、流动相离子强度和流动相pH值在内的色谱条件.经过考察,以SHIMSEN Ankylo SEC-300色谱柱(300 mm×7.8 mm,3μm)为固定相,以含有300 mmol/L NaCl和50 mmol/L磷酸盐(pH 7.0)的缓冲溶液为流动相时,VLP的色谱峰更窄,从而可获得更高的响应和更好的灵敏度,因此选择该色谱条件用于VLP与基质的分离.优化所得的方法具有较宽的线性范围,良好的重复性(峰面积的相对标准偏差不大于5.0％)和灵敏度(定量限为4.58～15.24μg/mL).将方法用于HPV原液中VLP的含量测定,监测VLP的稳定性.结果显示,HPV原液中VLP颗粒不稳定,于4°C放置一周后,VLP含量与生产后立即测得的含量相比存在一定程度的降解.此外,方法还可用于疫苗上清液中游离蛋白质的分析,监测铝佐剂对VLP的吸附情况.被测厂家的铝佐剂可较好的吸附VLP,无明显残余蛋白质检出.与传统的蛋白质定量方法相比,如Folin-酚法(Lowry法),该法具有操作简单、自动化程度高、分析通量高等优点,可实现VLP含量的批量化分析.

摘要： 试验旨在制备水貂肠炎病毒(Mink enteritis parvovirus,MEV)可溶性VP2蛋白及其病毒样颗粒(virus-like particles,VLPs).优化并合成MEV VP2基因,克隆至原核表达载体pET-30a(+),将重组质粒pET-30a-VP2与分子伴侣pTf16共同转化到宿主菌ER2566中,以不同培养温度、L-阿拉伯糖浓度和IPTG浓度进行诱导表达,收集样品进行SDS-PAGE和Western blotting分析.通过硫酸铵沉淀结合蔗糖密度梯度离心法对表达产物进行纯化,由SDS-PAGE进行鉴定,透析去除蔗糖,通过动态光散射技术(DLS)和透射电子显微镜(TEM)观察不同组装条件下VLPs的粒径和形态.用制备的MEV VLPs疫苗免疫水貂评价其免疫原性.结果显示,以2 g/L L-阿拉伯糖、0.2 mmol/L IPTG、25 °C培养16 h为诱导条件时,VP2蛋白在大肠杆菌中可溶性表达,分子质量约为65 ku.经Western blotting鉴定VP2蛋白具有良好的抗原特异性.将此表达产物利用硫酸铵沉淀结合蔗糖密度梯度离心法纯化后,纯度可达90％以上.在pH 8.0,150 mmol/L NaCl的透析液中,VP2经自组装可形成与天然MEV形状和粒径相似且具有血凝特性(1∶214)的VLPs.VLPs疫苗免疫水貂21 d后,测得水貂血清中的血凝抑制(HI)抗体水平均相对最高,可达1 ∶ 211,说明该VLP疫苗有较好的免疫原性,能有效预防MEV的感染.本试验结果表明,将pET-30a-VP2与pTf16在原核表达系统中共表达,可获得具有高免疫原性的VLPs,为后期MEV VLPs疫苗的研发奠定基础.

摘要： 为建立猪HEV的诊断方法，开发有效疫苗。本使验首先对蛋白的核酸序列进行优化，选择毕赤酵母表达戊型肝炎病毒的衣壳蛋白。摸索最佳发酵工艺表达蛋白，纯化表达的蛋白使其能够形成病毒样颗粒。然后对其形成的病毒样颗粒进行抗原性和免疫原性的研究，即诊断试剂盒的研制和猪戊型肝炎疫苗的研发。实验结果表明该疫苗具有良好的免疫原性和生物安全性，免疫兔子后能产生较高的中和抗体水平。建立的间接EUSA方法的特异性良好，重复性实验批内变异系数为7.99％，批间变异系数为9.79％。众所周知，病毒样颗粒蛋白较单体以及聚体形式的蛋白相比具有更好的抗原性和免疫原性。该病毒样颗粒可作为猪戊型肝炎的亚单位疫苗，为猪戊型肝炎的临床检测提供了一种快速有效的检测方法。

摘要： 口蹄疫(foot-and-mouth disease,FMD)是由口蹄疫病毒(foot-and-mouth disease virus,FMDV)感染偶蹄动物所引起的急性和高度接触性传染病,严重威胁着全球畜牧业的发展与食品安全,目前尚无有效的防治措施.病毒样颗粒(virus-like particles,VLP)是一种无致病性的笼状蛋白质颗粒,易被免疫细胞捕获,其抗原主要被MHC-I类分子提呈,但对固有免疫识别VLP的机制尚不清楚.肥大细胞是固有免疫的效应细胞,并在适应性免疫应答过程中发挥启动与调节作用,尽管近年来对肥大细胞在抗病毒感染中作用的研究取得了一定进展,但对肥大细胞在抗FMDV感染中的作用仍不清楚.本文首先构建重组质粒pcDNA3.1(+)-HBcAg-VPl-VP4. pcDNA3.1(+)-HBcAg和pcDNA3.1(+)-VPl-VP4，然后将其通过脂质体2000瞬时转染到HEK-293T细胞中，使其分别表达VLP. HBcAg和VPl-VP4蛋白。免疫印迹检测结果显示，VLP的分子量约为47 kDa，用透射电镜观察经磷钨酸负染的VLP，可见直径约为30 nm的病毒样颗粒结构，表明VLP制备成功。研究发现，PMC识别VLP所发生的脱颗粒主要是由TLR2和SR介导的，TLR2介导TNF-a分泌和抑制IL-6分泌，TLR4主要介导TNF-a和IL-10的分泌，PMC分泌TNF-n和IL-6是由SR介导，而抑制TNF-a、IL-6和IL-10分泌主要是由MR介导的。

摘要： 病毒样颗粒(virus-like particles,VLPs)由病毒衣壳蛋白或由衣壳蛋白和囊膜蛋白自我组装而成的一种多聚蛋白纳米结构.在形态和结构上与天然病毒相似, 但不含有原病毒的遗传物质,具有较好的免疫原性和安全性, 能够有效的刺激机体产生体液免疫和细胞免疫反应.它是一种比较安全的疫苗替代物,具有广阔的应用前景.自19世纪70年代,基于VLPs的乙肝病毒表面抗原VLPs (HBsAg)的第一个商品化疫苗获得许可之后,对于VLPs的研究也越来越多.到目前为止,已有30多种人和动物病毒的VLPs被成功包装.本文综述了病毒样颗粒分类、表达系统、免疫原性和研究进展，并总结了本实验室的工作：自2012年就致力于鸡传染性法氏囊病毒(IBDV)病毒样颗粒的研究。利用杆状病毒-昆虫细胞表达系统，表达了vvIBDV JL株VP2蛋白，经过电镜观察，VP2蛋白在昆虫细胞中自组装VLPs，本动物实验表明此VLPs能够诱导特异性的体液免疫和细胞免疫，表现出了良好的免疫原可对vvIBDV的攻击产生较好的保护作用，为研制IBD新型、高效、安全的疫苗奠定了基础，为成性IBD的有效防控提供了参考依据。

摘要： 为研制一种无生物传染性且极易保存稳定的小反刍兽疫病毒(PPRV)RNA阳性质控品,以pTrcHis-MS2质粒为模板,借助点突变技术在噬菌体MS2编码的外壳蛋白第15位与第16位氨基酸基因之间插入组氨酸蛋白标签的相应序列,构建了pTrcMS载体.将pGEM-T-N382质粒与pTrcMS质粒分别进行KpnⅠ+HindⅢ双酶切、连接从而构建了pTrcMS-PPRV重组质粒.将pTrcMS-PPRV重组菌进行原核表达,借助偶联组氨酸蛋白标签的磁珠捕获技术获得纯化的小反刍兽疫病毒样颗粒,对它进行特性鉴定并定量检测.结果显示,pTrcMS-PPRV病毒样物质纯度高;电镜下为不规则的、直径约为26nm的多边形;耐RNA酶A,稳定;经荧光RT-PCR定量检测,此病毒样物质的溶液浓度相当于108.56PFU/mL.本研究将为小反刍兽疫病毒分子生物学的检测提供阳性质控物质.

摘要： 目的:人乳头瘤病毒(HPV)治疗性疫苗在治疗宫颈上皮内瘤变或癌症的临床试验尚缺乏显著疗效.提高肿瘤抗原特异的细胞免疫应答是增强疫苗效力的关键.本研究旨在探索乙肝核心抗原病毒样颗粒(VLPs)作为治疗性疫苗载体的潜能,并评价其免疫学特性.rn 方法:根据文献选择有效的HPV16E7CTLs表位,经基因重组将其DNA片段克隆于乙肝核心抗原优势表位.重组蛋白诱导表达后,经硫酸铵盐析法和蔗糖密度梯度离心纯化,并经高效液相凝胶过滤色谱和电镜分析鉴定.制备的VLPs以预防性和治疗性策略分别对小鼠移植肿瘤进行免疫干预,检测小鼠肿瘤大小变化;此外,在体外以抗原肽刺激脾细胞,以ELISA检测IFN-γ表达水平,ELISPOT检测分泌IFN-γ的淋巴细胞.rn 结果:呈递HPV16E749-57CTLs表位的重组VLPs可通过基因重组技术有效制备;VLPs预防性免疫完全抑制了TC-1小鼠移植肿瘤生长;VLPs治疗性免疫显著抑制了2-3mm肿瘤的增长,对于5～6mm甚至更大的肿瘤(8～9mm),同样具有明显抑制作用;VLPs结构对疫苗肿瘤抑制效果非常重要;疫苗免疫小鼠脾细胞具有提高的IFN-γ、降低的IL-4与TGF-β1表达,以及增强的分泌IFN-γ的淋巴细胞水平;此外,VLPs刺激机体产生了有效的免疫记忆应答,至少可持续15周;机体预存的抗载体抗体对VLPs疫苗发挥作用未产生显著影响.rn 结论:本研究强烈提示VLPs可激发有效的细胞免疫应答,是有潜力的治疗性疫苗载体.

摘要： 为研究禽流感病毒(AIV)结构蛋白在昆虫细胞中的表达及其生物活性，本研究通过杆状病毒／昆虫细胞表达系统，单独表达H5亚型AIV血凝素(HA)及共表达HA和基质蛋白(M1)，并采用免疫组织化学法，SDS-PAGE，western blot和血凝实验等对重组蛋白进行鉴定及分析。实验结果表明：透射电子显微镜观察结果显示，共表达HA和M1的重组蛋白可以形成病毒样颗粒(VLPs)，而单独表达HA未观察到VLPs;表达的重组蛋白HA和HA-M1都能够凝集鸡红细胞，血凝效价分别为1：27和1：28。结果显示该方法获得的AIV结构蛋白，具有良好的生物学活性和抗原活性，从而为禽流感VLPs疫苗的研究提供依据。

摘要： 我们通过昆虫杆状病毒表达系统成功制备了H5N1禽流感病毒的病毒样颗粒(VLPs)。由HA、NA和M1三种结构蛋白组成VLPS称为VLP3，由HA、NA、M1和NP四种结构蛋白组成VLPS称为VLP4。小鼠免疫实验表明，无论是皮下注射免疫还是滴鼻免疫途径，VLPS都能引起小鼠产生较强的体液免疫和细胞免疫。而VLP4的免疫效果优于VLP3。SPF鸡免疫试验结果表明，VLP4免疫产生的HI抗体水平高于VLP3。攻毒保护实验结果表明，VLP4免疫能针对流感病毒流行株提供100％的保护，而同时VLP3只能提供50％的保护。这些结果表明，NP蛋白促进了VLPS诱导小鼠和SPF鸡产生更强的免疫反应。

摘要： 犬瘟热是由犬瘟热病毒引起的急性、高度接触性传染病.疫苗接种是预防犬瘟热的有效方式.本研究克隆giant panda/SX/2014M和H基因,通过flashBAC杆状病毒表达系统分别拯救表达CDV M和H蛋白的重组杆状病毒,共感染昆虫细胞Sf9,即可自主装配成CDV VLPs并分泌到培养上清.电镜观察CDV VLPs大小约100nm左右,表面有纤突结构,呈典型的副黏病毒特征.Westem Blot结果证实所构建CDV VLPs确由M与H蛋白组成.从而为CDV的疫苗研发及犬瘟热的防治奠定了基础.

摘要： 鸡传染性支气管炎病毒(Infectious bronchitis virus,IBV)可引起鸡传染性支气管炎(IB),主要侵害鸡的呼吸系统、泌尿系统和消化系统,表现出广泛的组织嗜性和高度的遗传变异性。本文利用昆虫杆状病毒表达系统表达了IBV的M和S蛋白，由这两种蛋白共同包装出VLPs，并释放到上清中。用该VLPs免疫SPF鸡可以诱导鸡体产生高效价的抗IBV的特异性抗体。

摘要： 衣壳蛋白VP60是兔出血症病毒粒子的主要结构蛋白，是病毒免疫保护性抗原。为研发兔出血症疫苗，对兔出血症病毒主要结构蛋白VP60的编码基因的序列进行密码子优化并。利用大肠杆菌表达系统获得重组蛋白并制备了效价高且特异性好的兔源多克隆。利用家蚕杆状病毒表达系统成功表达了VP60蛋白，经检测，VP60蛋白在家蚕中含量高并可形成病毒样空衣壳粒子。动物免疫实验显示，该空衣壳疫苗可有效刺激机体产生特异性抗体，攻毒实验表明疫苗免疫后的家兔可抵抗强毒攻击，病理检测结果显示此疫苗无毒副作用。这为制备安全有效的兔出血症基因工程疫苗等研究奠定基础。

摘要： 貉细小病毒病毒样颗粒、其制备方法与应用以及该病毒样颗粒制备的疫苗，属于重组疫苗制备领域。本发明针对貉细小病毒肠炎灭活疫苗免疫效力较低，活疫苗毒力返强的问题，提供了一种貉细小病毒病毒样颗粒，是将经过密码子优化的貉细小病毒基因RDPV‑VP2‑OPTI与昆虫表达载体pFastBac1连接得到供体质粒，然后转化到杆状病毒DH10 Bac E.coli中经培养获得表达貉细小病毒RDPV‑VP2蛋白的重组杆状病毒，然后转染SF21细胞，培养至细胞出现感染后收集细胞病毒液获得的。所述貉细小病毒病毒样颗粒与氢氧化铝胶佐剂混合后可制备获得貉细小病毒性肠炎疫苗。本发明适用于貉细小病毒性肠炎疫苗的制备。

摘要： 本发明公开了一种猪圆环病毒2型病毒样颗粒的制备方法，包括猪圆环病毒2型Cap重组蛋白包涵体的制备步骤：将编码Cap蛋白的PCV2‑ORF2基因全长DNA或已去掉编码Cap蛋白N’端信号肽碱基序列的PCV2‑ORF2 DNA片段插入原核表达载体中，转化大肠杆菌表达菌，诱导表达Cap重组蛋白；和Cap重组蛋白包涵体变性步骤；和溶液置换及蛋白复性步骤：采用恒体积透析法对变性蛋白溶液进行溶液置换与蛋白复性；和病毒样颗粒组装和回收步骤：使用中空纤维膜或膜包，以PBS对回收溶液进行超滤，浓缩；制备方法中蛋白复性效率高，可将包涵体持续、大量地制备得到病毒样颗粒，适合工业化生产。

摘要： 本发明涉及从用叶绿素靶向重组载体转化的植物中分离的PCV2制备疫苗组合物以在植物中表达的技术，并提供了携带编码重组蛋白的多核苷酸的重组载体，其中叶绿素靶向蛋白与PCV2衣壳蛋白彼此融合。另外，提供了用重组载体转化的转基因植物，从该转基因植物中分离和纯化靶蛋白的方法，通过使用该靶蛋白制备包含病毒样颗粒的疫苗组合物的方法，以及通过该制备方法制备的疫苗组合物。

摘要： 本发明提供了一种表达肠道病毒71型重组病毒样颗粒的表达系统，在原有内源表达盒的基础上增加了外源表达盒，通过采用不同的启动子实现两套表达盒表达水平不同，大大提高了对外源蛋白的表达能力，能够同时在一个表达系统内分别表达EV71病毒的P1前体蛋白和3CD蛋白酶、并完成自组装，最终形成均一、稳定的EV71病毒VLPs。该表达系统对于目标外源蛋白的表达能力强、产物纯度高，能够大规模制备免疫原型优异的EV71VLPs，进而可以用于优质的EV71手足口病疫苗的工业化生产；用该病毒样颗粒与其他肠道病毒的免疫原性成分联合制作多价手足口病疫苗，可以针对多种流行毒株提供广谱而全面的保护，从而有效提高对手足口病的预防效果。

摘要： 本发明提供了一种表达柯萨奇病毒6型重组病毒样颗粒的表达系统，在原有内源表达盒的基础上增加了外源表达盒，通过采用不同的启动子实现两套表达盒表达水平不同，大大提高了对外源蛋白的表达能力，能够同时在一个表达系统内分别表达CA6病毒的P1前体蛋白和3CD蛋白酶、并完成自组装，最终形成均一、稳定的CA6病毒VLPs。该表达系统对于目标外源蛋白的表达能力强、产物纯度高，能够大规模制备免疫原型优异的CA6VLPs，进而可以用于优质的CA6手足口病疫苗的工业化生产；用该病毒样颗粒与其他肠道病毒的免疫原性成分联合制作多价手足口病疫苗，可以针对多种流行毒株提供广谱而全面的保护，从而有效提高对手足口病的预防效果。

摘要： 本发明提供了一种表达柯萨奇病毒10型重组病毒样颗粒的表达系统，在原有内源表达盒的基础上增加了外源表达盒，通过采用不同的启动子实现两套表达盒表达水平不同，大大提高了对外源蛋白的表达能力，能够同时在一个表达系统内分别表达CA10病毒的P1前体蛋白和3CD蛋白酶、并完成自组装，最终形成均一、稳定的CA10病毒VLPs。该表达系统对于目标外源蛋白的表达能力强、产物纯度高，能够大规模制备免疫原型优异的CA10VLPs，进而可以用于优质的CA10手足口病疫苗的工业化生产；用该病毒样颗粒与其他肠道病毒的免疫原性成分联合制作多价手足口病疫苗，可以针对多种流行毒株提供广谱而全面的保护，从而有效提高对手足口病的预防效果。

摘要： 本发明提供了一种表达柯萨奇病毒16型重组病毒样颗粒的表达系统，在原有内源表达盒的基础上增加了外源表达盒，通过采用不同的启动子实现两套表达盒表达水平不同，大大提高了对外源蛋白的表达能力，能够同时在一个表达系统内分别表达CA16病毒的P1前体蛋白和3CD蛋白酶、并完成自组装，最终形成均一、稳定的CA16病毒VLPs。该表达系统对于目标外源蛋白的表达能力强、产物纯度高，能够大规模制备免疫原型优异的CA16VLPs，进而可以用于优质的CA16手足口病疫苗的工业化生产；用该病毒样颗粒与其他肠道病毒的免疫原性成分联合制作多价手足口病疫苗，可以针对多种流行毒株提供广谱而全面的保护，从而有效提高对手足口病的预防效果。

摘要： 本发明属于生物领域，公开了一种能够表达禽法氏囊病病毒样颗粒的重组杆状病毒的制备方法，包括如下步骤：步骤1：扩增鸡传染性法氏囊病病毒IBDV(GT株)的VP2基因后与pFastBac 1载体连接，连接产物转入DH5α感受态中，筛选阳性克隆获得重组质粒pFastBac 1‑VP2，将测序正确的pFastBac 1‑VP2转入DH10 Bac感受态中获得重组质粒Bacmid‑IBDV‑VP2；步骤2：将Bacmid‑IBDV‑VP2转入SF9细胞，收获重组杆状病毒。本发明采用鸡传染性法氏囊病病毒IBDV(GT株)作为VP2基因的来源病毒株，其能表现出更好的免疫效果。同时，本发明还提供一种病毒样颗粒极其制备方法，其优势在于：适于规模化生产、效价高、产物无需浓缩、纯化等工艺，节约成本，流程简单且安全。

摘要： 貉细小病毒病毒样颗粒、其制备方法与应用以及该病毒样颗粒制备的疫苗，属于重组疫苗制备领域。本发明针对貉细小病毒肠炎灭活疫苗免疫效力较低，活疫苗毒力返强的问题，提供了一种貉细小病毒病毒样颗粒，是将经过密码子优化的貉细小病毒基因RDPV‑VP2‑OPTI与昆虫表达载体pFastBac1连接得到供体质粒，然后转化到杆状病毒DH10 Bac E.coli中经培养获得表达貉细小病毒RDPV‑VP2蛋白的重组杆状病毒，然后转染SF21细胞，培养至细胞出现感染后收集细胞病毒液获得的。所述貉细小病毒病毒样颗粒与氢氧化铝胶佐剂混合后可制备获得貉细小病毒性肠炎疫苗。本发明适用于貉细小病毒性肠炎疫苗的制备。

摘要： 本发明公开了一种猪圆环病毒2型病毒样颗粒的制备方法，包括猪圆环病毒2型Cap重组蛋白包涵体的制备步骤：将编码Cap蛋白的PCV2‑ORF2基因全长DNA或已去掉编码Cap蛋白N’端信号肽碱基序列的PCV2‑ORF2 DNA片段插入原核表达载体中，转化大肠杆菌表达菌，诱导表达Cap重组蛋白；和Cap重组蛋白包涵体变性步骤；和溶液置换及蛋白复性步骤：采用恒体积透析法对变性蛋白溶液进行溶液置换与蛋白复性；和病毒样颗粒组装和回收步骤：使用中空纤维膜或膜包，以PBS对回收溶液进行超滤，浓缩；制备方法中蛋白复性效率高，可将包涵体持续、大量地制备得到病毒样颗粒，适合工业化生产。