刺五加皂苷E对人增生性瘢痕成纤维细胞生长的影响及其机制

摘要

目的探讨刺五加皂苷E对人增生性瘢痕成纤维细胞（Fb）生长的影响及作用机制。方法采用实验研究方法。收集北部战区总医院2018年10月—2019年3月收治的6例增生性瘢痕患者[男1例、女5例,年龄20～51（37±8）岁]的增生性瘢痕组织,培养第3～7代人增生性瘢痕Fb用于后续实验。取细胞,分为生理盐水组、100 μmol/L刺五加皂苷E组、200 μmol/L刺五加皂苷E组和400 μmol/L刺五加皂苷E组,分别加入生理盐水,终物质的量浓度为100、200、400 μmol/L的刺五加皂苷E。取细胞,分为单纯小干扰RNA（siRNA）-阴性对照组、单纯siRNA-血小板反应蛋白1（THBS1）组、siRNA-阴性对照+400 μmol/L刺五加皂苷E组和siRNA-THBS1+400 μmol/L刺五加皂苷E组,单纯siRNA-阴性对照组和siRNA-阴性对照+400 μmol/L刺五加皂苷E组细胞转染siRNA-阴性对照,单纯siRNA-THBS1组和siRNA-THBS1+400 μmol/L刺五加皂苷E组细胞转染siRNA-THBS1,转染24 h后单纯siRNA-阴性对照组和单纯siRNA-THBS1组细胞加入生理盐水,siRNA-阴性对照+400 μmol/L刺五加皂苷E组和siRNA-THBS1+400 μmol/L刺五加皂苷E组细胞加入终物质的量浓度为400 μmol/L的刺五加皂苷E。于处理后0（即刻）、12、24、36、48 h,采用噻唑蓝法检测细胞增殖活性（以吸光度值表示）。取细胞分为生理盐水组、200 μmol/L刺五加皂苷E组、400 μmol/L刺五加皂苷E组,另取细胞分为单纯siRNA-阴性对照组、单纯siRNA-THBS1组、siRNA-阴性对照+400 μmol/L刺五加皂苷E组、siRNA-THBS1+400 μmol/L刺五加皂苷E组,相应处理同前,于处理后24 h,行Hoechst 33258染色观察细胞凋亡情况。取细胞分为生理盐水组、100 μmol/L刺五加皂苷E组、200 μmol/L刺五加皂苷E组、400 μmol/L刺五加皂苷E组,另取细胞分为单纯siRNA-阴性对照组、单纯siRNA-THBS1组、siRNA-阴性对照+400 μmol/L刺五加皂苷E组、siRNA-THBS1+400 μmol/L刺五加皂苷E组,相应处理同前,于处理后24 h,采用蛋白质印迹法检测细胞THBS1蛋白水平。以上实验每组各时间点样本数均为3。对数据行析因设计方差分析、单因素方差分析、独立样本t检验、Bonferroni校正。结果处理后0 h,生理盐水组、100 μmol/L刺五加皂苷E组、200 μmol/L刺五加皂苷E组和400 μmol/L刺五加皂苷E组细胞吸光度值相近（P＆0.05）。处理后12、24、36、48 h,100 μmol/L刺五加皂苷E组、200 μmol/L刺五加皂苷E组、400 μmol/L刺五加皂苷E组细胞吸光度值均明显低于生理盐水组（t=7.64、28.94、13.69、5.87,6.96、22.83、14.75、11.52,21.09、20.15、29.52、23.12,P＆0.05或P＆0.01）。处理后0 h,单纯siRNA-阴性对照组、单纯siRNA-THBS1组、siRNA-阴性对照+400 μmol/L刺五加皂苷E组、siRNA-THBS1+400 μmol/L刺五加皂苷E组细胞吸光度值相近（P＆0.05）;处理后12、24、36、48 h,单纯siRNA-THBS1组、siRNA-阴性对照+400 μmol/L刺五加皂苷E组细胞吸光度值明显低于单纯siRNA-阴性对照组（t=7.14、44.87、20.67、40.98,9.26、11.08、15.33、20.56,P＆0.05或P＆0.01）,单纯siRNA-THBS1组、siRNA-阴性对照+400 μmol/L刺五加皂苷E组细胞吸光度值与siRNA-THBS1+400 μmol/L刺五加皂苷E组相近（P＆0.05）。处理后24 h,与生理盐水组比较,200 μmol/L刺五加皂苷E组和400 μmol/L刺五加皂苷E组凋亡细胞数量增加。处理后24 h,与单纯siRNA-阴性对照组比较,单纯siRNA-THBS1组和siRNA-阴性对照+400 μmol/L刺五加皂苷E组凋亡细胞数量增加;单纯siRNA-THBS1组、siRNA-阴性对照+400 μmol/L刺五加皂苷E组和siRNA-THBS1+400 μmol/L刺五加皂苷E组凋亡细胞数量相近。处理后24 h,100 μmol/L刺五加皂苷E组、200 μmol/L刺五加皂苷E组、400 μmol/L刺五加