人增生性瘢痕中整合素连接激酶表达及与血管生成的关系

摘要

目的探讨不同生长期人类瘢痕中整合素连接激酶（ILK）表达及与血管生成的关系。方法 （1）将笔者单位2009年12月-2010年12月收治的15例烧伤瘢痕患者按瘢痕生长时间分为:小于6个月组、6～12个月组、大于12个月组,每组5例。采集各组瘢痕组织,用免疫组织化学法观察ILK的表达分布,实时荧光定量RT-PCR法检测ILK mRNA的表达水平。（2）取小于6个月组瘢痕组织,分离培养瘢痕微血管内皮细胞（MEC）,免疫磁珠法纯化后用花青类荧光染料Cy3标记的凝血因子Ⅷ进行鉴定,以人皮肤Fb为对照。取对数生长期MEC,按随机数字表法分为3组:对照组,仅用含微血管生长添加剂的M131培养液培养;空质粒组,用空载质粒转染;ILK互补DNA转染组,用ILK互补DNA表达质粒转染。转染24 h后,实时荧光定量RT-PCR法检测各组细胞中ILK、激酶功能区受体（KDR）、fms样酪氨酸激酶1（Flt-1）的mRNA表达情况。对数据进行单因素方差分析。结果 （1）小于6个月组瘢痕组织表皮基底细胞、MEC及Fb胞质中均有ILK阳性表达,6～12个月组瘢痕组织中仅表皮基底细胞可见ILK阳性表达,大于12个月组瘢痕组织中ILK阳性表达不明显。（2）小于6个月组瘢痕组织中ILK mRNA表达水平（0.34±0.16）明显高于6～12个月组（0.17±0.06）及大于12个月组（0.07±0.13）,F=37.007,P=0.000。（3）纯化后MEC呈铺路石样密集生长,胞质中凝血因子Ⅷ呈阳性表达;人皮肤Fb中未见凝血因子Ⅷ表达。（4）ILK互补DNA转染组瘢痕MEC中ILK、KDR及Flt-1的mRNA表达水平分别为57.807±5.556、0.836±0.014、0.162±0.005,均显著高于对照组的0.018±0.003、0.028±0.020、0.023±0.004和空质粒组的0.042±0.005、0.039±0.007、0.046±0.003（F值分别为87.110、11.241、18.199,P值均小于0.01）。结论 ILK主要表达于小于6个月的早期瘢痕组织中,并可以通过调节瘢痕MEC中的KDR及Flt-1 mRNA表达来影响早期瘢痕的血管生成,在早期瘢痕增生过程中具有重要作用。