人EGF受体L2结构域在大肠杆菌中表达、包涵体柱上复性及纯化

摘要

以PCR方法从克隆的EGFR胞外区cDNA中扩增编码EGFR-L2结构域的DNA片段,在其3'端加入编码His6标签的序列,与pET-3c连接构建EGFR-L2原核表达载体.该蛋白在大肠杆菌BL21(DE3)中获得高效表达,免疫印迹分析表明表达产物全部以包涵体形式存在,分步透析法和稀释法都不能获得可溶性复性产物,而Ni2+-NTA柱上复性法不仅能够获得可溶性的EGFR-L2蛋白,而且产物同时得到高度纯化,纯度＞95%,复性的EGFR-L2与其配基EGF具有特异性的结合活性,但亲和力较低.这表明His6标签不但便于纯化目标蛋白,而且可利用Ni2+-NTA柱进行柱上复性,适用于不易通过常规方法复性的重组蛋白的制备.