一条新的可诱导PC12细胞转化为交感神经原表型的小分子肽链

摘要

目的根据神经生长因子(NGF)的氨基酸序列及其晶体构象资料,对β-NGF进行限制性酶解,从而获得关键的功能区域片段.方法选择溴化氰在9位Met处, Trypsin在Arg或Lys处裂解β-NGF,用 Sephadex G 50色谱、DE52离子交换色谱和反相高效液相色谱进行分离纯化.所得片段用PC12细胞测定活性,对活性片段进行氨基酸组成及序列分析.结果从β-NGF裂解片段中获得一可诱导PC12细胞分化的活性片段,氨基酸组成及序列分析表明,此片段由16肽GEFSVCDSVSVWVGDK与14肽HWNSYCTTTHTFVK通过一对二硫键连接而成,与β-NGF肽链的10～25和75～88氨基酸残基序列相对应.生物活性分析表明其最佳作用浓度为0.001～0.1 ng/ml.结论此实验获得了β-NGF关键的功能区域片段,虽然其空间结构和功能的关系尚需研究探讨,但它的成功分离和鉴定为合成或表达高活性小分子神经营养物质奠定了重要的基础.