大鼠原代肝细胞培养方法的建立

摘要

目的:探索混合胶原凝胶培养肝细胞的方法,观察培养鼠肝细胞的功能与形态特征,用于评价中药十八反的作用机理.方法:两步法分离鼠肝细胞,与鼠尾胶原溶液混合接种于培养板,观察培养鼠肝细胞的形态学特征和生化指标.采用RT-PCR技术,检测药物对P450亚酶CYP3A1表达的影响,进一步确证该体系的可靠性.结果:双层胶原培养体系可观察到典型的肝细胞形态特征,肝细胞功能检测显示肝细胞合成分泌的尿素、白蛋白,而乳酸脱氢酶漏出量较少,药物对P450亚酶CYP3A1表达的影响呈良好的剂量依赖性,同时双层胶原具有保持肝细胞活性的优点,可作为原代肝细胞培养的条件.结论:混合胶原凝胶培养能保留体内的细胞功能和活性,特别是保留药物代谢酶的活性.