用生物化学方法从植物内生真菌提取液中高通量筛选细菌β-内酰胺酶抑制物

摘要

目的 采用生物化学方法从植物内生真菌代谢物中筛选细菌β-酰胺酶抑制剂.方法 克隆β-内酰胺酶KPC-2、TEM-10和NDM-1基因至表达载体pET28;纯化重组蛋白质,以此为药靶,从植物内生真菌代谢产物库中高通量筛选β-内酰胺酶抑制物；检测效应物对β-内酰胺类药物的增效效应.结果 成功克隆了3个目的基因,纯化了重组蛋白质至纯度80-95％;从3752种真菌提取液中筛选确定了5个对3种纯化的β-内酰胺酶活性均有抑制的效应物,其中效应物PF000,212能够使美罗培南对3株携带NDM-1基因的临床分离“超级细菌”菌株的最低抑菌浓度降低8～16倍.结论 以β-内酰胺酶为药靶,以植物内生真菌代谢物为材料,应用生物化学方法进行高通量筛选,是获得新型β-内酰胺酶抑制物的一条有效途径.