交叉中和血清1型和血清3型鸭甲肝病毒单克隆抗体的制备与鉴定

摘要

鸭甲型肝炎(duck hepatitis A,DHA)是危害养鸭业的主要疾病之一,是一种雏鸭的急性、高度致死性传染病.本研究旨在研制一种对我国流行的鸭甲型肝炎血清1型(DHAV-1)和血清3型(DHAV-3)病毒具有交叉中和作用的单克隆抗体(monoclonal antibody,McAb).人工合成12条DHAV-1和DHAV-3的VP1蛋白共有的抗原表位肽,分别与钥孔血蓝蛋白(keyhole limpet hemocyanin,KLH)载体偶联作为免疫抗原,免疫BALB/c小鼠制备McAb.通过检测McAb与DHAV-1和DHAV-3的交叉反应性,测定McAb对病毒增殖的抑制效率、中和效价以及攻毒保护率等来筛选McAb.本研究共获得了 12株稳定分泌McAb的杂交瘤细胞株,其中6株(C1、C4、C7、C12、C13、C16)分泌的McAb同时与DHAV-1和DHAV-3发生特异性交叉反应;C1、C4、C7、C16可以抑制DHAV-1和DHAV-3在鸭胚中的增殖,抑制率在75.34％～100.00％不等;对DHAV-1和DHAV-3的中和效价:C1(1 ∶ 3&1∶ 5)、C4(1 ∶ 3&1 ∶ 3)、C7(1 ∶ 10&1∶ 11)和 C16(1 ∶ 9&1 ∶ 9);C7和 C16 对 DHAV-1 和 DHAV-3攻毒雏鸭的保护率较高,分别为"70％、80％"和"100％、60％".本研究成功研制出对DHAV-1和DHAV-3具有交叉中和活性的McAb 4株,其中2株对病毒的感染具有良好的预防效果,为DHA的防控提供了新材料和新思路.