摘要:为建立一种检测丝状支原体山羊亚种(Mycoplasma mycoides subsp.capri,Mmc)的SYBRGreenⅠ实时荧光定量PCR方法,本研究根据Mmc的MLC_1770基因序列设计特异性引物,以构建的Mmc-1770重组质粒为阳性标准品绘制标准曲线,并对该方法的特异性、灵敏性和重复进行验证.建立的标准曲线相关系数为0.999,扩增效率为101.3%;该方法特异性较好与山羊支原体山羊肺炎亚种(Mycoplasma capricolum subsp.capripneumoniae,Mccp)、大肠杆菌(Escherichia coli,Ec)、巴氏杆菌(Pasteurellamultocida,Pm)、金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus,SA)、副猪嗜血杆菌(Haemophilusparasuis,HPS)、绵酶炎支原体(Myplasma ovipenumoniae,Mo)、羊传染性脓疱毒(orf virus,ORFV)均无交叉反应;最低检测限为226拷贝/uL,比常规PCR高100倍;组内变异系数为0.54%-0.79%,组间变异系数为0.70%-0.96%.表明该方法具有特异性强,重复性好,检测速度快等优点,适用于临床样品中Mmc的快速准确检测.