猪TRIM11基因克隆及其促进猪伪狂犬病毒在体外增殖的研究

摘要

为初步研究猪TR IM11的免疫学功能,以猪颌下淋巴结cDNA为模板扩增TR IM11基因cDNA并对该基因进行了蛋白质结构预测和组织表达谱分析,将该基因与PiggyBac载体相连获得真核表达载体PB-TRIM11,之后转染PK15细胞获得稳定表达细胞系.用猪伪狂犬病毒(PRV)刺激过表达TRIM11 PK15细胞和对照组细胞后,于不同时间收获细胞上清,比较两组细胞上清中病毒滴度变化.结果表明,猪TRIM11的ORF长度为1 407 bp,编码468个氨基酸,该氨基酸序列含有3个TRIM家族保守的结构域.组织表达谱分析显示,猪TRIM11在脂肪组织、肺的表达量较高,而在心、回肠、十二指肠、直肠中的转录量较低.成功克隆了猪TRIM11 cDNA序列并构建了真核转录载体PB-TRIM11,qRT-PCR检测结果表明TR IM11在PK15细胞系中成功表达.检测感染PRV后过表达TRIM11 PK15细胞和对照组细胞上清液病毒的TCID50发现过表达TRIM11组的病毒滴度始终高于对照组.过表达TRIM11有一定的促进PRV增殖的作用,为进一步研究猪TRIM11在天然免疫中的作用奠定了基础.