黄曲霉毒素B1单克隆抗体的制备及基于该抗体的黄曲霉毒素B1免疫学检测方法的建立

摘要

为了快速准确检测粮食与饲料中黄曲霉毒素B1(AFB1)含量,本试验制备了具有高灵敏度的AFB1单克隆抗体,并将其应用于AFB1间接竞争酶联免疫吸附测定(ELISA)方法的建立.采用碳二亚胺(EDC)法制备AFB1完全抗原[AFB1-牛血清白蛋白(BSA)和AFB1-鸡卵白蛋白(OVA)],并免疫BALB/c小鼠.经细胞融合,筛选出能够分泌高灵敏度AFB1单克隆抗体的杂交瘤细胞株.采用体内诱生腹水法,大量制备AFB1单克隆抗体,并对其免疫学特性进行鉴定.基于制备的AFB1单克隆抗体,建立AFB1间接竞争ELISA检测方法.结果显示:通过筛选,获得稳定产生抗体的杂交瘤细胞株9H1F5,经间接ELISA方法测定,获得的AFB1单克隆抗体的效价高达5.12×105,亲和力常数(Ka)=6.72×107 L/mol,抗体亚型为免疫球蛋白G2(IgG2).采用间接竞争ELISA方法测得AFB1的半数抑制浓度(IC50)为0.232 ng/mL,检测范围为0.014～1.920 ng/mL,最低检测限为0.014 ng/mL.同时,该AFB1单克隆抗体与黄曲霉毒素B2(AFB2)、黄曲霉毒素G1(AFG1)、黄曲霉毒素G2(AFG2)、黄曲霉毒素M1(AFM1)的交叉反应率分别为40.21％、33.19％、31.96％、4.40％,与其他霉菌毒素无交叉反应.由上述结果可知,本试验成功制备了灵敏度高、特异性强的AFB1单克隆抗体,并基于该抗体建立了检测AFB1的间接竞争ELISA方法,为粮食与饲料中AFB1快速免疫学检测奠定了基础.