非洲猪瘟病毒CD2v重组蛋白真核表达及单克隆抗体的制备

摘要

本研究目的为表达非洲猪瘟病毒CD2v蛋白作为抗原,制备鼠源性CD2v单克隆抗体。以ASFV-SY18分离株为模板合成EP402R基因,构建pcDNA3.1-His真核表达载体,通过Expi-CHO表达系统获得重组CD2v蛋白,应用细胞融合技术制备杂交瘤细胞并筛选出单克隆抗体细胞株。实验结果显示,截短EP402R基因成功克隆至表达载体,构建出pcDNA3.1-CD2v-His质粒,转染至CHO细胞后收获重组蛋白,使用镍亲和层析法纯化带有His标签的CD2v蛋白。经SDS-PAGE及Western blot确认,CD2v蛋白大小为55 kDa且与免疫小鼠血清反应良好。共筛选出3株杂交瘤细胞株分别命名为2D6、4B2及4G12。间接ELISA鉴定3株杂交瘤细胞所制备的腹水效价均高达1∶12800,Western blot及间接免疫荧光实验证明3株单克隆抗体均可特异性识别重组CD2v蛋白。本研究成功制备了CD2v重组蛋白及其特异性单克隆抗体,为开发竞争性ELISA诊断方法及ASFV野毒鉴定奠定了基础。