共聚焦激光扫描显微镜对厚样本光学断层及其三维重建

摘要

目的:探讨共聚焦系统各参数对厚样本光学断层、三维重建的影响.方法:用共聚焦系统对醛诱导后的大鼠主动脉作光学断层.分析激光强度、探测针孔直径、扫描步距等参数对内弹性膜三维重建的影响.结果和结论:(1)针孔为1 Airy单位,调整激光强度以满足离开焦点1/2 Z-轴分辨率距离时,焦平面最强荧光信号减弱50%,此条件下获得的光学切片分辨率和信息完整性达最佳平衡,切片厚度可经验地定视为等于系统Z轴分辨率.(2)在上述条件下,扫描步距为Z-轴分辨率时,重建结构完整.(3)当扫描步距不变,针孔小于1 Airy单位时,重建结构部分缺损;针孔大1 Airy单位时,重建结构模糊.(4)样本经透明处理后,断层深度可增大4倍.