超声波辅助Urea-Free试剂结合热变性快速酶解蛋白质

摘要

建立了一个超声功率-超声时间的安全区域,在此范围内进行超声波辅助酶解时,能避免超声波随机断裂蛋白质;在此安全区域内采用响应面法获得最佳超声功率和超声时间.建立了超声波辅助Urea-Free试剂结合热变性快速酶解蛋白质的方法,将蛋白质依次进行10 min超声波浴辅助Urea-Free还原烷基化反应、90 ℃热变性15 min, 超声波辅助胰蛋白酶酶解15 s.应用此快速酶解方法鉴定3种典型标准蛋白质(牛血清白蛋白、细胞色素C和肌红蛋白),在25 min内达到与传统整夜酶解方法相同的鉴定结果,并获得更高的序列覆盖率.