农杆菌介导南瓜遗传转化体系的建立

摘要

以南瓜金辉一号(Cucurbita moschata 'Jinhui 1')为实验材料,利用根癌农杆菌(Agrobacterium tumefaciens)介导转化南瓜子叶节,研究了预培养时间、侵染时间、乙酰丁香酮(AS)浓度和共培养时间,抗生素羧苄青霉素(Carb)、头孢霉素(Cef)以及筛选剂卡那霉素(Kan)等因素对离体不定芽的影响,建立了南瓜最适遗传转化体系.结果表明:外植体预培养0天,侵染时间30分钟,AS浓度为100 mg·L-1,共培养5天可获得最高遗传转化效率;最适除菌剂为Cef,其最适浓度为500mg·L-1;最适Kan筛选浓度为100 mg·L-1:在MS培养基上培养抗性芽生根,经PCR和Southern blot检测,证明为转基因植株.