探索miR-145介导的黑青斑河鲀IFN-γ对MHC Ⅱ的精细调控

摘要

哺乳类miR-145通过作用于MHC Ⅱ的反式作用因子CIITA对MHC Ⅱ的表达进行调控.为探讨在黑青斑河鲍中miR-145是否对CIITA基因存在直接调控作用,进而间接调控MHC Ⅱ的表达,将黑青斑河鲍CIITA的3'非编码区(3'UTR)序列亚克隆至pMIR-Report载体中,通过双荧光素酶报告系统研究两者是否存在直接的靶标作用.结果表明:将miR-145类似物和构建的CIITA 3'UTR载体共转染至Hela细胞后,荧光素酶活性没有出现预期的下调,反而出现上调;增大或减少miR-145的转染量,荧光素酶活性的变化幅度也会随之改变.将miR-145类似物和构建的CIITA 3'UTR载体共转染至COS-7细胞,荧光素酶的活性没有改变.离体转染miR-145到河鲀原代脾细胞中,检测MHC Ⅱ基因的表达水平也没有变化,表明miR-145确实对河鲀CIITA没有靶标作用.