Notch1 siRNA影响Notch-Wnt信号通路对人成骨肉瘤细胞增殖的抑制作用

摘要

背景与目的:骨肉瘤是骨肿瘤中最常见的原发性恶性肿瘤.迄今为止,骨肉瘤发生、发展的相关分子机制尚不明确,临床上也没有针对性的有效治疗药物.该研究探索Notch1蛋白在骨肉瘤中的作用及与影响骨肉瘤发生、发展的Notch-Wnt信号通路之间的关系.方法:采用免疫组织化学染色法检测骨肉瘤组织中Notch1的表达;采用四甲基偶氮唑蓝(methyl thiazolyl tetrazolium,MTT)法与流式细胞术检测靶向Notch1 siRNA转染的人骨肉瘤细胞MG-63与U-2 OS凋亡的影响,实时荧光定量聚合酶链反应(real-time fluorescent quantitative polymerase chain reaction,RTFQ-PCR)、蛋白质印迹法(Western bolt)检测转染后骨肉瘤细胞内Notch与Wnt信号通路中相关蛋白及RIPK4蛋白的表达变化.结果:Notch1在人骨肉瘤活检组织中的表达呈阳性,同时Notch1 siRNA能够显著抑制人骨肉瘤MG-63和U-2 OS细胞的增殖,并促进骨肉瘤细胞发生凋亡.此外诱导降低或缺失Notch1后,Notch与Wnt信号通路中相关蛋白及RIPK4蛋白表达明显减少.结论:siRNA-Notch1脂质体转染骨肉瘤细胞后,可影响Notch1-Wnt信号通路并降低促增殖分子RIPK4的表达,发挥抑制肿瘤细胞生长的作用.