人p53四聚功能域对提高抗人CD3单链抗体亲和力的作用

摘要

目的探讨人p53四聚功能域在提高抗人CD3单链抗体(scFv)亲和力方面的作用.方法利用递归PCR法扩增人IgG3上游铰链区与人p53四聚功能域融合基因,克隆入pUC19载体中构建pUC19/IgG3/p53克隆载体.将抗人CD3 scFv克隆入pUC19/IgG3/p53载体中,构建抗人CD3 scFv/人p53四聚功能域融合基因.经酶切鉴定及序列测定证实后,将融合基因克隆入真核表达载体pSecTag2-B中,转染HeLa细胞进行表达,表达产物纯化后利用流式细胞仪进行活性测定.结果获得了抗人CD3 scFv/人p53四聚功能域融合基因,基因全长882 bp,可编码294个氨基酸,与已发表的抗人CD3 scFv、人IgG3上游铰链区和人p53四聚功能域基因cDNA序列一致.表达产物经SDS-PAGE和Western印迹实验证实为约35kD的特异蛋白条带,纯化后经流式细胞仪检测可以特异性地结合人外周血单个核细胞(PBMC)细胞,亲和力高于scFv.结论人IgG3上游铰链区/p53四聚功能域基因与抗人CD3 scFv基因融合后表达产物的功能性亲和力大大提高,为提高抗体的功能性亲和力开辟了新的思路.