EGFR shRNA联合雷帕霉素对Colo-16细胞增殖、迁移及侵袭的影响

摘要

目的:明确表皮生长因子受体(EGFR)shRNA联合雷帕霉素(RAPA)对皮肤鳞癌Colo-16细胞增殖、迁移和侵袭的影响,并对其可能机制进行初步探究。方法:Colo-16细胞分为5组:正常细胞组(Colo-16细胞+磷酸盐缓冲液PBS)、阴性对照组(转染shRNA-NC质粒的Colo-16细胞+PBS)、EGFR shRNA组(转染EGFR shRNA质粒的Colo-16细胞+PBS)、RAPA组(Colo-16细胞+RAPA)、联合组(转染EGFR shRNA质粒的Colo-16细胞+RAPA)。采用细胞计数试剂盒(CCK-8)和克隆形成实验测定细胞增殖能力;划痕实验和Transwell法检测细胞迁移和侵袭情况,采用Western blot、RT-PCR检测增殖、侵袭相关基因Ki-67、MMP-2、MMP-9蛋白和mRNA水平表达。多组间比较采用单因素方差分析,组间两两多重比较采用SNK-q检验。结果:EGFR shRNA组、RAPA组及联合组Colo-16细胞吸光度A值、细胞克隆形成率、划痕愈合率、侵袭细胞数目、Ki-67、MMP-2、MM-P9等基因蛋白和mRNA表达显著低于正常细胞组与阴性对照组,差异有统计学意义(均P0.05)。结论:EGFR shRNA联合雷帕霉素在抑制Colo-16细胞增殖、迁移及侵袭方面有协同增效的作用,其机制可能与EGFR/PI3K/AKT/mTOR信号通路的双重抑制作用相关。