重组牛凝乳酶基因在Bacillus megaterium WH320中的表达及其酶学性质研究

摘要

对牛凝乳酶基因进行密码子优化,并首次在高效表达宿主巨大芽孢杆菌中表达.通过克隆牛凝乳酶基因,将片段与穿梭质粒pHIS1525连接,连接产物转化大肠杆菌XL-10,筛选出阳性克隆子,所获重组质粒经酶切、测序鉴定,证实含目的片段.通过原生质体转化的方法转化到表达宿主巨大芽孢杆菌WH320.用木糖诱导表达,离心取上清经镍柱亲和层析(Ni-NTA)和聚丙烯酰氨凝胶电泳(SDS-PAGE)分离纯化并鉴定,测定重组牛凝乳酶的酶学性质,表明在巨大芽孢杆菌中得到有效表达.为我国利用生物工程技术的方法自主生产凝乳酶提供了基础..