牛肌肉生长抑制素基因打靶载体的构建与鉴定

摘要

本试验旨在构建用于牛肌肉生长抑制素(MSTN)基因敲除的置换型打靶载体.基于已发布的MSTN基因序列,选取第3外显子约600 bp作为靶位点,在其上、下游设计2条同源臂,分别为4.4和1.4 kb.以pPNTⅢ为骨架载体,在其2个多克隆位点处插入同源臂,构建出置换型打靶载体MSTN-KO-pPNTⅢ.结果显示,经DNA测序及酶切鉴定证实1.4 kb同源短臂和4.4 kb同源长臂均正确插入基础载体中.结果表明,成功构建出牛MSTN-KO pPNTⅢ打靶载体.