根据禽网状内皮组织增生症病毒(REV)长末端重复序列LTR基因保守区域设计并合成一对引物,建立基于SYBR Green Ⅰ模式的实时荧光PCR方法(Real-time PCR).以常规PCR产物为标准品建立标准曲线,并对方法的特异性、敏感性、可重复性以及再现性、检出率进行评价.结果表明,该方法只从REV阳性样本检出扩增信号,不与其它病原出现交叉反应;熔解温度为86.8+0.5℃,无引物二聚体;扩增产物片段大小为270bp,与预期大小相符,测序结果证实为REV靶序列;在1.01×1.02～1.01×109拷贝之间呈现良好的线性关系.相关系数为0.999,扩增效率为99.7%,最低可检测101拷贝～反应阳性标准品,比常规PCR敏感103倍:组内变异系数、组间变异系数分别为4.80%～5.72%、0.75%～3.87%;对16例临床疑似病例进行检测,阳性率为81.25%(13～16),随机抽取7份阳性扩增产物进行测序,证实为REV序列.本研究建立的SYBR Green Ⅰ实时荧光PCR特异性强、通量高、灵敏度高、检测速度快,为REV的快速检测、分子流行病学调查以及监测REV污染疫苗情况提供新方法.
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