人白介素-2基因打靶载体的构建、转染及鉴定

摘要

为研究人白介素-2基因在奶山羊胎儿成纤维细胞中的表达,构建人白介素-2基因的山羊β-酪蛋白位点打靶载体。以质粒pBC1为模板扩增山羊β-酪蛋白上游2.5 kb和下游3.5 kb的序列作为5′和3′同源臂,将克隆得到的人白介素-2基因和neo基因插入到2个同源臂之间,获得山羊β-酪蛋白基因打靶载体pBNI53。利用脂质体将重组质粒转染奶山羊胎儿成纤维细胞进行G418筛选,并采用PCR和实时定量PCR方法对人白介素-2基因在稳定株中的表达进行验证。检测结果表明,本试验构建的打靶载体pBNI53成功转染奶山羊胎儿成纤维细胞,将人白介素-2基因成功整合至奶山羊胎儿成纤维细胞基因组中,为通过体细胞核移植法制备人白介素-2基因乳腺生物反应器的研究奠定了基础。