Numb基因抑制细胞周期蛋白D1表达影响人肾癌细胞Caki-1的细胞周期和增殖

摘要

目的研究Numb基因对人肾癌细胞的细胞周期和增殖能力的影响及相关机制。方法选取人肾癌Caki—1细胞为研究对象,采用Numb—ORF表达质粒转染细胞为实验组,设置阴性对照和空白对照组。采用荧光定量聚合酶链反应（RT—qPCR）和蛋白质印迹法检测各组中Numb和细胞周期蛋白D1（cyclin D1）的表达,采用流式细胞术检测各组的细胞周期,采用酶标仪检测细胞在波长490 nm处的吸光度值,评价各组细胞的增殖活力。结果实验组PCR扩增Numb的△Ct值为1.92±0.39,阴性对照组为5.05±0.45,空白对照组为5.13±0.31;实验组蛋白质相对表达强度为6.67±0.83,阴性对照组为3.08±0.47,空白对照组为2.85±0.36,差异有统计学意义（P=0.00）;实验组cyclin D1的△Ct值为6.20±0.87,阴性对照组为4.35±0.51,空白对照组为4.56±0.31,差异有统计学意义（P=0.02）。实验组蛋白质相对表达强度为5.85±0.72,阴性对照组为10.04±0.83,空白对照组为11.88±1.26,差异有统计学意义（P=0.00）。实验组中G0/G1期细胞的比例为（54.29±4.15）%,高于阴性对照组的（38.69±2.60）%和空白对照组的（41.28±1.29）%,差异有统计学意义（P=0.00）。增殖实验中,实验组24 h的吸光度值为0.67±0.07,低于阴性对照组（0.93±0.10）和空白对照组（1.02±0.06）,差异有统计学意义（P=0.00）。结论 Numb基因可以提高肾癌Caki—1细胞G0/G1期细胞比例,抑制细胞增殖,其机制可能是通过抑制cyclin D1表达实现的。