版纳微型猪近交系胎儿成纤维细胞的分离培养及性别鉴定

摘要

旨在建立版纳微型猪近交系猪胎儿成纤维细胞分离培养及性别鉴定的技术方法,采用胶原酶消化法分离版纳微型猪近交系猪胎儿成纤维细胞,同时根据GenBank上猪的SRY基因序列设计合成一对引物,并以3-actin基因为内参基因,利用多重PCR进行胚胎性别鉴定,并优化了PCR反应条件.结果表明,经胶原酶消化能成功分离版纳微型猪近交系猪胎儿成纤维细胞,2号、3号胚胎提取的DNA经多重PCR能扩出309 bp的SRY基因片段和132 bp的内参基因片段,为雄性胚胎,1、4、5、6、7号只扩增出内参基因,为雌性胚胎.PCR产物经测序与NCBI上发表的SRY基因序列比对,同源性为99％,进一步说明了性别鉴定结果的正确性.为转基因、基因敲除试验特定性别供体细胞的选择提供可靠的技术依据.