艰难梭菌细胞毒素B功能区的原核表达及免疫原性

摘要

目的 纯化已表达艰难梭菌(CD)细胞毒素B羧基末端受体结合区(CD3)的基因,并检测其免疫原性.方法 PCR克隆目的基因到表达载体pET22b(+),重组质粒转化到E. coli BL21(DE3),经IPTG诱导表达,利用金属螯合色谱层析方法纯化后,SDS-PAGE方法对纯化蛋白进行分析.并检测其免疫反应性.结果 成功表达的是分子质量约为71.3 ku的重组蛋白,占菌体总蛋白的34%,可溶性表达占上清的22.7%,包涵体占沉淀的25.7%.重组蛋白纯化后可溶性蛋白浓度为0.781 g/L.并与抗毒素B抗体具有良好的免疫原性.结论 成功克隆了CD3基因,构建的重组质粒可高效表达CD3重组蛋白,为CD相关性疾病的诊断及后期制备疫苗,提供了有力的保障.