人Polycomb家族成员NSPc1蛋白的原核表达纯化及多克隆抗体制备

摘要

目的 Polycomb家族成员NSPc1多克隆抗体的制备与检测.方法 应用PCR技术扩增人NSPc1编码区全长序列并插入到pET-43.1a(+)载体中,在大肠杆菌BL21中表达融合蛋白HIS-NSPc1.利用所表达的融合蛋白中含有的6×His标签进行亲和纯化.用所获得的纯化蛋白免疫新西兰大白兔,获得兔抗人NSPc1多克隆抗体.用Western blot检测抗体免疫反虚的特异性.结果 在大肠杆菌中表达并纯化了人NSPc1重组蛋白,纯度达95%,用其免疫新西兰大白兔,成功制备了相应兔源多克隆抗体,Western blot实验中该抗体可以特异识别内源及外源性NSPc1蛋白.结论 原核表达的NSPc1融合蛋白可以被纯化,并具有足够的蛋白免疫原性,所制备的相应多克隆抗体具有良好的特异性,可以运用于NSPc1基因的功能研究.