人PHF8蛋白的原核表达、纯化与结晶

摘要

目的 探讨人PHF8蛋白的原核表达、纯化与结晶条件. 方法 用分子克隆的方法构建重组质粒PHFS/pet28b,测序鉴定正确后将其转入Rosetta 2(DE3),IPTG诱导表达融合蛋白.对融合蛋白进行分离纯化结晶,衍射分析,并用计算机软件解析其晶体结构. 结果 经过诱导,含有PHF8/pet28b的Rosetta 2在原核表达系统中表达出了相对分子质量为40 ku的c-PHF8融合蛋白,c-PHF8在合适的悬滴条件下得到六方柱晶体. 结论 利用原核表达体系成功地表达了人PHF8催化活性中心结构域并获得结晶,为进一步的三维结构解析和PHF8功能研究奠定了基础.