人细胞骨架调节蛋白基因Nelin的原核表达与分离纯化

摘要

人Nelin基因是本研究室在筛选心脏cDNA文库大规模表达序列标签(ESTs)测定的基础上,克隆得到的一个心肌组织特异表达的新基因[1-2].最近的研究表明,Nelin基因在调节细胞迁移和黏附过程中发挥重要作用[3].为制备Nelin的单克隆和多克隆抗体所需的抗原,拟首先选择大肠杆菌作为基因工程表达宿主,建立高效的大肠杆菌表达体系,以获得纯化的Nelin蛋白.本研究在前期工作中曾将Nelin基因的cDNA全长重组到多个原核表达载体上(pBV220、pGEX-5X-1、pET28a),但存在着不能正常表达和表达量过低的问题,为解决这一问题,运用计算机序列分析软件,分析和预测其B细胞优势表位.选择Nelin全长序列中具有较多B细胞优势表位以及特异性最强的片段进行表达纯化,为Nelin基因的原核表达以及大量生产积累了宝贵经验.