焦曲霉右旋糖酐酶的纯化和性质

摘要

用制备凝胶电泳从焦曲霉(Aspergilluts ussus)菌株的培养液中分离纯化了右旋糖酐酶(EC 3.2.1.11)。纯酶经聚丙烯酰胺凝胶电泳分析为均一的,比活力为820 u/mg,提高20.5倍。酶作用最适 pH 为5.0—5.5,最适温度为50℃,在 pH 4.5—7.5和40℃以下稳定,在50℃保温30分钟酶活力损失55%。用 SDS-凝胶电泳测定酶的分子量为68000,用聚丙烯酰胺凝胶薄层等电聚焦电泳测得 pI 值为5.5。紫外吸收光谱在274nm 有最大吸收值,低谷在252 nm。纯酶只作用于α-1,6-葡萄糖苷键,水解右旋糖酐的产物为异麦芽糖、异麦芽三糖、葡萄糖和少量的较高聚合度的异麦芽寡糖,该酶为内切型的。作用于交联葡聚糖凝胶(Sephadex)时,随其交联度的增加酶作用能力减弱。纯酶作用于不同分子量的右旋糖酐(MW:2×10~4、1×10^(?)、4×10~4)的K_m值分别为0.30%、0.61%和0.70%。Hg^(2+)、Ag^+对酶完全抑制,Cu^(2+)、Mn^(2+)、Pb^(2+)、Be^(2+)、Fe^(3+)和 F^-对酶有一定的抑制作用,金属螯合剂 EDTA 对酶活性无影响,N-溴代琥珀酰亚胺(NBS)对酶强烈抑制。