利用绿色荧光蛋白基因gfp研究芽胞杆菌的启动子活性

摘要

利用绿色荧光蛋白基因gfpmut3,分别标记苏云金芽胞杆菌(Bacillus thuringiensis)的cry3A启动子Pcry3A、BtI-BtII启动子PBtI-BtII和来自蜡状芽胞杆菌特异启动子P44-12以研究其表达差异.其中,Pcry3A和PBtI-BtII分别与gfpmut3构成融合基因,以调控gfpmut3在苏云金芽胞杆菌中的表达.将重组质粒pGFP-304(含P44-12)、pGFPExpA(含Pcry3A- gfpmut3融合基因)和pGFPExpB(含PBtI-BtII- gfpmut3融合基因)分别导入大肠杆菌(Escherichia coli)和苏云金芽胞杆菌后发现,P44-12和PBtI-BtII在大肠杆菌与苏云金芽胞杆菌中均可表达gfpmut3,其中PBtI-BtII在大肠杆菌中具有极强的启动基因表达的能力.而Pcry3A不能启动gfpmut3在大肠杆菌中表达,在苏云金芽胞杆菌中启动的gfpmut3表达的荧光强度也较弱.进一步通过荧光显微镜和生物活性检测器对含重组质粒pGFP-304、pGFPExpA和pGFPExpB的转化子分别进行荧光检测及微量热检测.结果表明,3种启动子驱动下的gfpmut3基因均可在苏云金芽胞杆菌无晶体突变株BMB171中表达并检测得到不同的发光类型.微量热法检测发现P44-12和PBtI-BtII启动gfpmut3表达的代谢热低于Pcry3A驱动gfpmut3表达的代谢热.