苏云金芽胞杆菌拟步行甲亚种YBT-1765中稳定质粒pBMB175的克隆和功能分析

摘要

从苏云金芽胞杆菌拟步行甲亚种YBT-1765中克隆得到一个大小约15.2 kb的质粒pBMB175,构建了该质粒的限制性图谱,通过功能验证,将其最小的复制区定位在一个1151bp的片段上.分析了包含有这个复制区的一个大小为4152 bp的核苷酸序列,该片段包含有3个编码框(ORF1、OFR2和ORF3).氨基酸序列同源性比较发现, ORF1(767AA)与UvrD-旋促酶、重组酶RecD和RecB家族具有20%～30%的相似性;ORF2(149AA)没有发现与任何已知序列具有同源性;ORF3(83AA)与pGI3中一个未知功能的蛋白(ORF7)具有34%的相似性.通过缺失及序列比较分析推测ORF2可能编码一种新的复制蛋白.因此pBMB175的复制类型可能属于一类新的复制家族.利用最小复制区构建的重组质粒在无抗生素选择压力下可稳定遗传40多代,具备构建稳定遗传质粒载体的潜力.