高温α-淀粉酶基因突变体在大肠杆菌、毕赤酵母中的表达

摘要

对地衣芽孢杆菌(Bacillus licheniformis)高温α-淀粉酶(amyE)基因进行改造获得的基因突变体(amyEM),通过PCR扩增,将此基因分别克隆至大肠杆菌表达载体pBV220和毕赤酵母表达载体pPIC9K上,并分别转化大肠杆菌DH5α和毕赤酵母GS115感受态细胞,获得重组大肠杆菌和重组毕赤酵母.通过表达产物的酶活性检测和SDS-PAGE分析,证明突变α-淀粉酶(AmyEM)在大肠杆菌、毕赤酵母中获得有效表达.对重组大肠杆菌产生的α-淀粉酶的粗酶性质分析表明,此酶分子量约为55kDa.其最适反应温度为80℃～90℃,与野生型基因相比,其最适pH均为6.0,但不同的是突变体在pH 5.0～5.5时表现出较高的酶活力;在毕赤酵母细胞的表达产物可分泌至胞外.由于酵母可对蛋白进行糖基化,酶分子量增加到60kDa,最适pH也改变为5.5.此高温α-淀粉酶突变体所具有的在微酸性环境具有较高酶活力的性质,具有重要的潜在工业应用价值.