口蹄疫病毒VP1基因在番茄中的表达及转基因番茄对豚鼠诱导免疫保护

摘要

构建克隆有O型口蹄疫病毒China99株VP1基因的植物双元表达载体pBin438/VP1.通过农杆菌介导法转化番茄子叶,经卡那霉素抗性筛选,获得60株抗性植株.对抗性植株分别做PCR、RT-PCR检测目的基因的整合与转录,ELISA筛选约40%的卡那抗性植株阳性,分别提取两株ELISA和Western blot检测阳性的转基因番茄叶片蛋白与弗氏佐剂乳化,于O、15、30d经肌肉途径免疫豚鼠,第三次免疫后28d用100ID50的同源强毒攻击,根据豚鼠抗体水平的消长动态和免疫豚鼠抗强毒攻击的保护率进行转基因植物疫苗免疫原性的评估.结果表明,双元表达载体pBin438/VP1构建正确,PCR、RT-PCR结果证实口蹄疫病毒VP1基因已整合到番茄基因组并在转录水平表达,ELISA和Western blot检测重组蛋白能够与FMDV阳性血清反应.转基因番茄第三次免疫豚鼠后21d血清效价最高可达1:64,攻毒后两组免疫豚鼠保护率分别达80%和40%,证明转基因番茄表达的VP1蛋白具有良好的免疫原性.