迟眼蕈蚊抗菌肽BhSGAMP-1-S在大肠杆菌中的优化表达及其活性分析

摘要

[目的]BhSGAMP-1是迟眼蕈蚊唾液腺抗菌肽,为了能够更好的了解其分子特性,我们将其表达、纯化并进行了活性测定.[方法]依据大肠杆菌稀有密码子设计并合成了抗菌肽基因BhSGAMP-1-S,以pMAL-c2X作为表达载体在大肠杆菌TB1中进行融合表达,融合蛋白通过麦芽糖亲和层析柱进行纯化,获得的融合蛋白经肠激酶切割后,混合物通过分子筛凝胶层析和反相高效液相色谱来获得单体重组抗菌肽BhSGAMP-1-S,对获得的抗菌肽进行活性测定.[结果]在最优的表达条件下融合蛋白以可溶的形式表达,100 mL诱导菌液经多步纯化后可得0.38 mg的重组抗菌肽BhSGAMP-1-S,抑菌活性测定表明所获得的抗菌肽对部分测试革兰氏阳性细菌、革兰氏阴性细菌和真菌有较强的抑菌活性.[结论]本研究第一次成功的在大肠杆菌中诱导表达了修饰合成的抗菌肽BhSGAMP-1-S,纯化后的抗菌肽具有很好的抑菌活性,这为进一步研究和应用奠定了基础.