人体肠道细菌寡营养培养组条件的优化研究

摘要

【目的】探讨寡营养对人体肠道细菌培养组的条件。【方法】通过稀释富集培养基、固体平板和增菌肉汤培养基成分获得寡营养培养基。对健康人粪便样本分别用原液(0)、5、10、20、30和40倍稀释的富集培养基(添加羊血和瘤胃液的血培养瓶)连续增菌,在不同时间点(第0、3、6、9、15、27、30天)吸取增菌液,用YCFA(yeast casitone fatty acid)固体培养平板分离菌落;用YCFA增菌肉汤增菌后再次挑取单菌落,利用基质辅助激光解吸/电离飞行时间(matrix-assisted laser desorption/ionization time-of-flight mass spectrometry,MALDI-TOF)质谱和16S rRNA基因测序鉴定菌株。通过比较上述6种寡营养条件分离肠道菌群的效果,选取富集培养基原液、稀释10倍和30倍这3种条件下分离效果较好的富集条件,与同样稀释倍数条件的固体平板和增菌肉汤分别组合成9种培养基条件,进一步优化肠道菌群的培养组条件。【结果】在6种寡营养富集培养基中,未稀释(原液)、10倍和30倍稀释的富集培养基分离细菌的种类比其他稀释倍数多,其中10倍稀释的富集培养基分离细菌种数最多;同时除去原液,仅在寡营养条件中分离细菌为24种。在进一步优化固体培养基平板和增菌肉汤下,发现原液富集培养基-10倍稀释的固体平板和增菌肉汤培养基、10倍稀释的富集培养基-原液或10倍稀释的固体平板和增菌肉汤培养基这3个组合分离的细菌种数较多;除去原液,仅在寡营养条件中分离细菌为20种,其中10倍稀释的富集培养基-原液的固体平板和增菌肉汤培养基分离的菌种数最多。【结论】通过稀释富集培养基、固体平板和增菌肉汤培养基成分获得的寡营养培养条件,能够分离出约40%的常规培养条件分离不到的细菌,为从人体肠道微生物群分离更多的菌种提供了有效的方法。