人心肌肌钙蛋白I基因的克隆及其在大肠埃希菌中的表达

摘要

目的从人心肌组织中克隆出心肌肌钙蛋白I(cardiac troponin I, cTnI)的cDNA,构建成表达重组体导入特定宿主菌,以期大量表达并获得高纯度的心肌肌钙蛋白I,为临床检测心肌损伤及预后提供诊断试剂材料.方法利用RT-PCR方法从人心肌细胞的总RNA中克隆出编码人心肌肌钙蛋白I的cDNA片段,将其插入原核表达载体形成重组体并导入宿主菌BL21(DE3)中,经异丙基硫代-β-D-半乳糖苷(IPTG)诱导,表达出带6个组氨酸标签的融合蛋白,Ni-NTA树脂纯化后行Western blot进行鉴定.结果成功获取了人cTnI的cDNA,并在大肠埃希菌中高效表达.经Ni-NTA树脂纯化后获得的产物可与其特异性单克隆抗体反应.结论成功克隆了cTnI基因,构建的重组体能够在大肠埃希菌中高效表达,经纯化可获得电泳单点纯的cTnI蛋白.