虾夷扇贝过敏原tropomyosin的克隆表达、纯化及免疫学鉴定

摘要

从虾夷扇贝(Patinopecten yessoensis)肌肉中提取总RNA,RT-PCR克隆虾夷扇贝中变应原原肌球蛋白的全长基因,根据序列设计带有酶切位点的特异性引物,扩增扇贝tropomyosin的完整开放阅读框,与pET-28a载体连接并转化大肠杆菌Escherichia.coil BL21(DE3),诱导表达后,Ni2+亲和层析柱纯化重组蛋白,Western-blot检测其免疫学活性.经序列测定,该基因含有长度为855 bp的开放阅读框,编码284个氨基酸,其在GenBank数据库中的登录号为EU839640.SDS-PAGE检测该重组变应原在大肠杆菌中高效表达36 kD的目的蛋白,且重组变应原具有良好的IgE结合活性.研究获得了具有变应原活性的重组虾夷扇贝tropomyosin,为扇贝过敏性疾病的诊断和治疗奠定了基础.