人肌肌酸激酶在SDS溶液中失活与构象变化的比较研究

摘要

应用紫外差吸收光谱、荧光发射光谱、ＣＤ先谱等监测手段，研究了ＳＤＳ溶液滴定人肌肌酸激酶时的构象与活力变化的关系。结果表明酶的活力丧失先于以紫外差吸收先谱、荧先发射谱和巯基暴露数目所监测到的构象变化。ＳＤＳ滴定时引起的酶的荧光发射光谱的变化在低滴定度阶段随着ＳＤＳ滴定量的增加，荧光强度下降，发射峰位红移，当ＳＤＳ浓度达到２．１ｍｍｏｌ／Ｌ时，荧光强度增大，继续增加ＳＤＳ滴定量，荧光强度又降低，发射峰位红移直至终态。紫外差吸收光谱随着ＳＤＳ溶液的加入，２８１ｎｍ．２８７ｎｍ和２９２ｎｍ的负差吸收峰增大。ＣＤ光谱结果表明在本实验所用的ＳＤＳ浓度范围内，ＳＤＳ对人肌肌酸激酶的二级结构几乎没有影响。上述结果支持了酶的活性部位构象柔性的观点。