野生角瓜根结线虫抗性相关基因CmWRKY20的克隆与表达分析

摘要

WRKY转录因子参与调控与植物免疫反应相关的转录重编程,对植物抗病性发挥调控作用.为了解析WRKY在野生角瓜对根结线虫(RKN)抗性中的作用,通过RT-PCR并结合RACE技术从角瓜根系中克隆CmWRKY20全长cDNA序列,采用DNAStar和DNAMAN进行氨基酸序列与系统进化分析,通过qRT-PCR进行基因表达分析,利用农杆菌介导的烟草叶片细胞转化法进行编码蛋白的亚细胞定位.结果表明,CmWRKY20转录因子cDNA序列全长1603 bp,5′非翻译区646 bp,3′非翻译区320 bp,ORF长度1017 bp,编码338个氨基酸,GenBank登录号MN365875;CmWRKY20具有1个核定位信号和1个WRKY保守结构域,锌指基序为C2 H2,归类于WRKY第Ⅱ组,与黄瓜、甜瓜等作物WRKY的氨基酸序列同源性较高,亲缘关系较近;CmWRKY20表达表现为抗病材料高于感病材料,根、茎高于叶片,CmWRKY20受根结线虫快速诱导,水杨酸(SA)和茉莉酸甲酯(MeJA)对CmWRKY20表达既有协同效应又有拮抗作用,CmWRKY20蛋白被定位于细胞膜上.CmWRKY20可能通过SA/JA信号传导参与对根结线虫防卫反应的调控.