第一部分:PKCβ在肿瘤发生发展中的作用研究第二部分:新型双吲哚马来酰亚胺类衍生物WK234抗慢性髓性白血病作用及机制研究

摘要

蛋白激酶C(Protein Kinase C,PKC)是一组丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶家族。PKC传导来自细胞外的大量受体信号,在多种生理和病理过程中起重要作用。近年来研究发现。PKC可能成为肿瘤治疗的靶点。PKCβ由N-末端的调控区和C-末端的催化区组成的单一多肽,分子量为80kDa；PKCβ基因选择性剪切产生两种蛋白PKCβⅠ和PKCβⅡ,仅在C-末端V5区的50或52个氨基酸不同。PKCβ参与实体瘤和血液系统肿瘤的发生发展,如结肠癌、乳腺癌、肺癌和白血病等。PKCβ参与多条肿瘤相关的信号通路,如MAPK、GSK3β和AKT等信号通路的转导。
　　 本论文通过将PKCβⅠ和PKCβⅡ基因转染入小鼠成纤维细胞NIH-3T3,经过筛选鉴定,建立了稳定高表达PKCβⅠ和PKCβⅡ的小鼠成纤维细胞株,分别命名为NIH-3T3/PKCβⅠ和NIH-3T3/PKCβⅡ。研究发现PKCβⅡ使NIH-3T3细胞变小,生长加快,软琼脂集落形成能力增加；PKCβⅡ促进肿瘤较早形成,肿瘤体积较大；而PKCβⅠ对NIH-3T3细胞的形态与增殖无明显影响；PKCβⅠ和PKCβⅡ均使NIH-3T3细胞G1期比例增加,划痕愈合能力、细胞粘附能力增强；PKCβⅠ使NIH-3T3细胞穿过人工基底膜能力下降,而PKCβⅡ使侵袭能力增强,但两者对NIH-3T3细胞分泌MMPs能力均没有影响。上述生物学的改变与PKCβ下游ERK、GSK3β信号通路的激活有关。上述这些结果提示PKCβⅡ在肿瘤细胞增殖、侵袭转移中起着重要作用。采用Western blot方法检测了一系列肿瘤细胞中PKCβⅠ和PKCβⅡ的表达,发现两者均在人慢性髓性白血病K562细胞中表达较高,尤其以PKCβⅡ蛋白表达更明显。因此采用RNAi方法进一步研究了PKCβⅡ对肿瘤细胞增殖能力的影响。研究发现,与空载体细胞比较,稳定沉默PKCβⅡ使K562细胞生长速度减慢,软琼脂集落形成能力下降,G1期细胞比例略增加；稳定沉默PKCβⅡ使K562细胞中p-ERK和p-GSK3p表达较低,而p-p38和p-AKT的表达显著增加。这些结果提示,PKCβⅡ在K562细胞增殖中起重要作用。这与PKCβ下游的ERK和GSK3β通路有关。
　　 总之,本文成功地建立了稳定高表达PKCβⅠ和PKCβⅡ的小鼠成纤维细胞的筛选模型,PKCβⅡ与肿瘤发生发展密切相关,其下游的优势通路为ERK和GSK3β信号通路。