茶病灵芝、树灵芝和无柄紫灵芝化学成分及生物活性研究

摘要

灵芝属真菌属于多孔菌目(Polyporales)，灵芝科(Ganodermataceae)，主要分布在中国、朝鲜半岛和日本，国内分布于福建、海南、安徽、山东、浙江、江西、湖南、广东等地。含有多糖、三萜、甾体类、核苷类、生物碱、氨基酸及微量元素化合物等成分。其中，起主要作用的是多糖和三萜类化合物。具有抗肿瘤作用，保肝护肝作用，抗氧化、抗衰老作用，心脏保护作用，改善记忆作用，抗病毒、抑制细菌作用等。
　　本文运用多种色谱技术和波谱技术，对茶病灵芝，树灵芝和无柄紫灵芝进行了系统的化学成分研究，并对其粗提物及单体成分进行了药理活性筛选。
　　活性筛选结果显示:1.保肝活性:采用MTT法观察茶病灵芝粗提物，茶病灵芝单体化合物和树灵芝单体化合物对人肝细胞HL-7702细胞成活率的影响。结果显示茶病灵芝95％乙醇提取物50％乙醇大孔树脂洗脱部分在10-5M时表现出一定的保肝活性，新化合物1，4和5在10-5M时表现出一定的保肝活性;同时，化合物11和26在10-5M时也表现出一定的保肝活性。树灵芝单体化合物50，53，54，59，63和64在10-5M时也表现出一定的保肝活性。
　　2.细胞毒活性:采用MTT法测定了茶病灵芝部分化合物对五种人癌细胞的抑制作用。结果显示样品浓度10-6M时，化合物30对癌细胞H460表现出一定的细胞毒活性;化合物31对癌细胞H460，BGC823和HCT116表现出一定的细胞毒活性。
　　3.多囊肾抑制作用方面，在MDCK囊泡模型中，化合物2，6和7能够抑制囊泡的形成和增大。其中化合物2和7能够显著抑制囊泡的增大，化合物6有抑制作用但仅仅在第12天有统计学意义，并且没有化合物2和7的抑制作用显著;浓度均为12.5μM时化合物2，6和7不影响MDCK细胞的细胞生存率;浓度均为12.5μM时化合物2，6和7不影响总细胞集落数;化合物7能够显著抑制MDCK囊的形成。对Ras/MAPK信号通路的作用结果显示:化合物7在不同浓度时(3.125，12.5和50μM)均能够显著降低H-Ras蛋白，B-raf蛋白，p-MEK蛋白，p-ERK蛋白，Egr-1蛋白和c-fos蛋白的表达水平，Raf-1蛋白的表达水平呈剂量依赖的关系。
　　4.抑制蛋白酪氨酸激酶活性:采用MTT法观察茶病灵芝粗提物和部分单体化合物对蛋白酪氨酸激酶的抑制活性，结果显示茶病灵芝95％乙醇提取物50％乙醇大孔树脂洗脱部分在10-5M时表现出一定的蛋白酪氨酸激酶的抑制活性(抑制率为78.11％)，各化合物均无明显的蛋白酪氨酸激酶抑制活性(IC50＞10μmol·L-1)。
　　本论文从三种灵芝中共分得102个化合物（其中有6个为茶病灵芝和树灵芝共有，有2个为树灵芝和无柄紫灵芝共有）。从茶病灵芝乙醇提取物中共分离鉴定了48个化合物，从树灵芝乙醇提取物中共分离鉴定了45个化合物，从无柄紫灵芝乙醇提取物中共分离鉴定了9个化合物。其中，茶病灵芝95％乙醇提取物50％乙醇大孔树脂洗脱部分在10-5M时表现出一定的保肝活性和蛋白酪氨酸激酶抑制活性;化合物1，4，5，11，26，50，53，54，59，63和64在10-5M时表现出一定的保肝活性;样品浓度10-6M时，化合物30对癌细胞H460表现出一定的细胞毒活性，化合物31对癌细胞H460，BGC823和HCT116表现出一定的细胞毒活性;在MDCK囊泡模型中，化合物2，6和7能够抑制囊泡的形成和增大。

目录

摘要

前言

第一章 灵芝属真菌化学成分和药理活性研究概况

第一节 概述

第二节 灵芝属真菌化学成分研究概况

第三节 灵芝属真菌药理活性研究概况

参考文献

第二章 茶病灵芝、树灵芝和无柄紫灵芝化学成分及生物活性研究

第一节 化学成分研究结果

一、茶病灵芝的化学成分研究结果

二、树灵芝的化学成分研究结果

三、无柄紫灵芝的化学成分研究结果

第二节 新化合物的结构鉴定

一、茶病灵芝中新化合物的结构鉴定

二、树灵芝中新化合物的结构鉴定

第二节 已知化合物的结构鉴定

一、茶病灵芝中已知化合物的结构鉴定

二、树灵芝中已知化合物的结构鉴定

三．无柄紫灵芝中已知化合物的结构鉴定

第三节 生物活性评价

一、保肝活性筛选

二、细胞毒活性测定

三、多囊肾的抑制作用

四、蛋白酪氨酸激酶抑制剂筛选

参考文献

第三章 总结与讨论

一、化学成分研究结果

二、生物活性研究结果

三、讨论

第四章 实验部分

第一节 植物来源与鉴定

第二节 实验仪器与试剂

一、实验仪器

二、色谱材料

一、茶病灵芝的提取分离流程

二、树灵芝的提取分离流程

三、无柄紫灵芝的提取分离流程

第四节 化合物结构鉴定数据

一、茶病灵芝中化合物结构鉴定数据

二、树灵芝中化合物结构鉴定数据

三、无柄紫灵芝中化合物结构鉴定数据

已发表和待发表的文章

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致谢

附图

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