不同体外诱导分化来源巨噬细胞表型分子检测及极化功能比较

摘要

目的： 比较人多能干细胞(hPSCs)，人脐带血CD34+细胞与人白血病细胞系(THP-1)来源巨噬细胞表型分子以及不同极化状态下炎症因子表达水平，确定hPSC来源巨噬细胞功能特性。 方法： 通过hPSC体外诱导分化产生高纯度高产量成熟巨噬细胞;用佛波酯(PMA)处理THP-1细胞获得贴壁巨噬细胞;分离提取人脐带血CD34+细胞经体外诱导分化获得成熟巨噬细胞。以流式技术检测三种来源巨噬细胞表型分子表达情况;分别用脂多糖(LPS)和白细胞介素4(IL-4)刺激三种来源巨噬细胞，通过荧光定量PCR方法检测M1和M2极化状态下，促炎基因IL-1β、IL-6、IL-12β和TNF-α，以及抗炎因子IL-10的基因表达变化情况。 结果： hPSC/AGM-S3共培养系统、脐血CD34+细胞和THP-1来源巨噬细胞均高表达髓系相关表型分子CD45，巨噬细胞相关分子CD64和CD11c。hPSC/AGM-S3共培养系统和脐血CD34+细胞来源巨噬细胞同时高表达髓系相关表型分子HLA-Ⅰ和CD36，以及巨噬细胞相关表型分子CD14，CD68，CD86和CD206;然而，THP1来源巨噬细胞均不表达以上表型分子。利用LPS和IL-4刺激不同来源巨噬细胞，结果显示三种来源巨噬细胞表达的促炎因子IL-1β、IL6、IL-12β、TNF-α在LPS刺激条件下，表达水平都显著高于IL-4刺激;然而，只有THP1来源巨噬细胞在IL-4刺激9h后，抗炎因子IL-10的基因表达水平显著高于LPS刺激。研究发现，共培养早期(D3)来源巨噬细胞在IL-4刺激3h后，抗炎因子IL-10基因表达水平显著高于LPS刺激。综合以上数据，hPSC/AGM-S3共培养系统、脐血CD34+细胞和THP-1来源巨噬细胞均可在LPS刺激下，有效极化成M1型巨噬细胞，高表达炎症因子IL-1β、IL6、IL-12β、TNF-α。hPSC/AGM-S3共培养系统和脐血CD34+细胞来源巨噬细胞不能在体外被IL-4有效极化成M2型巨噬细胞，TNF-1来源巨噬细胞和共培养早期（共培养3天）来源巨噬细胞在IL-4刺激下，抗炎因子IL-10表达水平显著升高。 结论： 三种不同来源巨噬细胞具有显著表型分子表达差异。hPSC/AGM-S3共培养14d和人脐带血CD34+细胞来源巨噬细胞可表达更强的巨噬细胞功能性分子。THP-1可在不同刺激下极化成M1和M2型，但所需刺激时间较长;hPSC/AGM-S3共培养14d和人脐带血CD34+细胞来源巨噬细胞在较短刺激下即可分化成M1型，但没有M2型极化。hPS/AGM-S3共培养3d来源巨噬细胞具有显著的M2极化功能，提示共培养3d来源巨噬细胞可有效地被极化成M1型和M2型，且具有M2型偏向性。

目录

摘要

前言

材料与方法

一、主要材料

二、实验技术

实验结果

第一部分不同来源巨噬细胞的培养

1 hPSC／AGM-S3共培养来源巨噬细胞

2人脐带血CD34+细胞来源巨噬细胞

3 THP-1细胞经刺激产生巨噬细胞

第二部分不同来源巨噬细胞表型分子比较

1三种来源巨噬细胞表型分子表达比较

2三种来源巨噬细胞典型表型分子流式检测结果

第三部分不同来源巨噬细胞M1／M2极化功能比较

1三种来源巨噬细胞促炎因子表达变化

2三种来源巨噬细胞抗炎因子表达变化

第四部分不同种系hPSC来源巨噬细胞M1／M2极化功能比较

讨论

小结

创新性

参考文献

缩略词表

文献综述 巨噬细胞在骨髓移植后的作用进展

个人简历

致谢

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